جداسازي و تأييد مولكولي سريع استرپتومايسس هاي توليد كننده آنتي بيوتيك استرپتومايسين

Rapid Isolation and Molecular Detection of Streptomycin-Producing Streptomycetes

گونه هاي استرپتومايسس، باكتري هاي رشته اي گرم مثبت و هوازي هستند كه ازخاك جدا مي شوند و دامنه وسيعي از آنتي بيوتيك ها را توليد مي كنند. استرپتومايسس گريزئوس آنتي بيوتيك استرپتومايسين و اسپور را حتي در محيط مايع توليد مي كنند. دسته ژني توليد آنتي بيوتيك استرپتومايسين داراي ژن strR است كه پروتئين تنظيم كننده اختصاصي اين دسته ژني را كد مي نمايد. هدف از اين تحقيق جداسازي و تأييد سريع استرپتومايست هاي توليد كننده آنتي بيوتيك استرپتومايسين به ويژه استرپتومايسس گريزئوس از خاك هاي ايران است تا براي افزايش توليد آنتي بيوتيك استرپتومايسين درستكاري شوند. روش بررسي: دراين تحقيق از يك محيط كشت نيمه اختصاصي ابتكاري جديد به نام ميحط كشت FZmsn براي جداسازي استرپتومايست ها از محيط هاي طبيعي به كار رفت. 50 كلني رشد يافته بر روي محيط كشت FZmsn بر اساس خصوصيات مورفولوژيكي و مطالعات ميكروسكوپي به عنوان سويه هاي استر پتومايسس جداسازي شد. يك جفت پرايمر اختصاصي براي شناسايي ژن strR به وسيله نرم افزار اوليگو طراحي گرديد. نتايج: با تكنيك Colony-PCR، شش كلني از كلني هاي سويه هاي استرپتومايسس به عنوان كلني هاي استرپتومايسس گريزئوس تعيين شد. نتيجه گيري: از سويه هاي استرپتومايسس بومي به منظور درستكاري ژنتيكي استرپتومايسس گريزئوس جهت افزايش توليد آنتي بيوتيك استرپتومايسين استفاده خواهد شد

Streptomyces species are mycelial, aerobic gram-positive bacteria that are isolated from soil and produce a diverse range of antibiotics. Streptomyces griseus produces the antibiotic, streptomycin and forms spores even in a liquid culture. The gene cluster for the production of Streptomycin antibiotic contains strR gene that encodes StrR, a pathway-specific regulator. Then, this pathway-specific regulator induces transcription of other streptomycin production genes in the gene cluster. The overall aim of this work was rapid isolation and molecular detection of streptomycin-producing Streptomycetes, especially S. griseus, from Iranian soils in order to manipulate them for increased production of streptomycin. Methods: This research used new initiative half-specific medium for isolation of Streptomycetes from natural environments, called FZmsn. The fifty colonies of Streptomyces strains grown on the surface of FZmsn medium isolated from environmental samples were defined on the basis of their morphological characteristics and light microscope studies. A set of primers was designed to detect strR by OLIGO software. Results: In colony-PCR reactions followed by gel electrophoresis, 6 colonies from Streptomyces strains colonies were detected as S. griseus colonies. Conclusion: These native Streptomyces strains will be used for genetic manipulation of S. griseus in order to increase production levels of streptomycin.