مقايسه ي روش هاي كشت ميكروبي و PCR در تعيين آلودگي رده هاي سلولي به مايكوپلاسما

The Comparison of Microbial Culture and PCR Methods in Detection Of Cell Line to Mycoplasma

مقدمه: مايكوپلاسماها از آلوده كنندگان اصلي رده هاي سلولي هستند كه به عنوان مشكل عمده ي اقتصادي و بيولوژيكي در زمينه هاي تحقيقات پايه تشخيص و فرآورده هاي بيوتكنولوژي در نظر گرفته مي شود. تشخيص مايكوپلاسما در كشت هاي سلولي ابتدا به وسيله ي كشت ميكروبي آغاز شد و سپس رنگ آميزي DAPI و آزمايش هاي سرولوژي از قبيل آزمايش ايمونوفلورسانس غير مستقيم، آزمايش DNAprobe، PCR-ELISA، PCR و Real-Time PCR براي شناسايي مايكوپلاسما توسعه يافت. روش ها: در اين مطالعه، يك روش سريع حساس اختصاصي براي تشخيص گونه هاي مختلف مايكوپلاسما در كشت هاي سلولي مورد استفاده قرار گرفت. اين روش بر اساس واكنش PCR و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي جنس 11 گونه ي مختلف مايكوپلاسما انجام گرفت. يافته ها: از 183 رده ي سلولي مختلف موجود در بانك سلولي مورد بررسي با روش PCR 48/6 درصد رده هاي سلولي آلودگي به مايكوپلاسما را نشان داد؛ در حالي كه با روش كشت ميكروبي 27/3 درصد از رده هاي سلولي آلودگي به مايكوپلاسما را نشان دادند. نتايج به دست آمده توسط روش PCR در مقايسه با روش كشت ميكروبي حساسيت 100 درصد و ويژگي 70/7 درصد را نشان داد نتيجه گيري: نتايج به دست آمده با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي گونه هاي مختلف مايكوپلاسما نشان داد كه مهم ترين و عمده ترين گونه هاي آلوده كننده ي رده هاي سلولي به ترتيب اهميت آلودگي شامل مايكوپلاسما فرمانتانس، مايكوپلاسما آرجينيني، مايكوپلاسما هيوراينيس و مايكوپلاسما اورال بودند. اين مطالعه همچنين نشان داد كه برخي از رده هاي سلولي با بيش از يك گونه مايكوپلاسما آلوده بودند.

Background: Mycoplasma is a major contaminant agent of cell lines and is cosiderd as a serious problem of economic and biological importance in basic research, diagnosis, and biotechnology products. Detection of mycoplasma infection in cell cultures started on microbiological culture; later, other methods like DAPI staining and serological tests such as Indirect Immunofluorescnse, ELISA, DNA probe, PCR, PCR-ELISA, and Real-Time PCR developed for detection of mycoplasma. In this study, we detect the contamination of varity of mycoplasma species in cell lines in national cell bank of Iran. Methods: In this study, a sensitive, specific, and rapid method was used for detection of varity of mycoplasma species in cell lines. This method was based on a PCR reaction using genus specific primers for 11 mycoplasma species. Results: Mycoplasma contamination using this assay was examind for 183 different cell lines deposited in national cell bank of Iran. PCR showed that 48.6% of cell lines were contaminated with mycoplasma while 27.3% of them were found to be infected by microbial culture. In comparison to microbiological culture, PCR method was shown to be 100% sensitive and 70.7% specific. Conclusion: Our results using species specific primers reveald that the most important contaminating mycoplasma species in cell lines were mycoplasma fermentans, mycoplasma arginini, mycoplasma hyorhinis, and mycoplasma orale. We were also able to identify a number of cell lines which were contaminated whit more than one species of mycoplasma.