تهيه ماده حد واسط مناسب براي توليد ايمونوگلوبولين تزريق وريدي از پلاسماي انساني

Preparation of an intermediate product suitable for production of IVIg

سابقه و هدف پلاسماي انسان ماده‌اي‌حياتي و منحصر به فرد است كه حاوي پروتئين‌هاي مهم نظير آلبومين، ايمونوگلوبولين، فاكتورهاي انعقادي و غيره مي‌باشد و مصارف دارويي دارد. فرآيند تخليص ايمونوگلوبولين از پلاسما به روش اصلي پالايش با اتانل كوهن انجام مي‌شود و محصول پايه ، فركشن II مي‌باشد. جهت دستيابي به فركشن II با شرايط مناسب براي استفاده به عنوان ماده اوليه در خالص‌سازي ايمونوگلوبولين تزريق وريدي، از روش تغيير يافته كوهن استفاده گرديد. هدف از تهيه اين ماده حد واسط، استفاده از آن براي مراحل بعدي تخليص و ويروس‌زدايي جهت توليد ايمونوگلوبولين تزريق وريدي بوده ‌است. مواد و روش ها مطالعه انجام شده از نوع تجربي (experimental) بود. به منظور توليد خمير فركشن II ، پروتئين‌هاي مختلف پلاسما با استفاده از اتانل در غلظت‌هاي متفاوت و در شرايط كنترل شده همراه با تنظيم دما، pH و قدرت يوني رسوب داده شد. در طي مراحل مختلف ، فرآيند پالايش نمونه‌هاي توليد شده به منظور ارزيابي فرآيند توليد مورد آزمايش قرار گرفت و نتايج حاصل از هر مرحله توليد با يكديگر و نيز با پلاسما به عنوان ماده اوليه مقايسه گرديد. يافته ها نتايج به دست آمده حاكي از بازده بالا ( gr/kg plasma 5/2 ) و خلوص مناسب (بالاي 90 درصد) فركشن II مطابق استاندارد فارماكوپه به دست آمده بود به نحوي كه ساير پروتئين‌هاي ضروري پلاسما كه مي‌تواند براي تهيه ديگر فرآورده‌هاي پلاسمايي مـورد استفـاده قرار گيرند نيز در شرايط مطلوب حفظ شدند. فركشن II به دست آمده از نظر مقدار فعال كننده پري‌كاليكرين مطابق استاندارد فارماكوپه بود. در طي چند سري كاري انجام شده ، ساختار پروتئين تكرار پذيري خوبي را نشان داد كه با استانداردهاي استفاده شده نيز مطابقت داشت. نتيجه گيري فركشن II به دست آمده يك ماده حد واسط مناسب براي توليد ايمونوگلوبولين تزريق وريدي مي باشد كه مقدار تجمعات و همچنين ميزان فعال كننده پري كاليكرين آن در حد ناچيز است. از آن‌جايي كه ساختار محصول به دست آمده در حد مطلوب است مي‌توان از اين روش براي تهيه فركشن II در مقياس نيمه صنعتي و حتي صنعتي استفاده نمود.

Background and Objectives Human plasma is a valuable and unique material containing vital proteins such as albumin, immunoglobulin, and coagulation factors which have pharmaceutical applications. The most current process for purification of immunoglobulin is the Cohn fractionation procedure using ethanol. The basic material for production of immunoglobulin in this procedure is fraction II. In the present study, Cohn fractionation was modified appropriately in order to achieve fraction II with a quality suitable for production of intravenous immunoglobulin. Materials and Methods Various plasma proteins were precipitated using varying concentrations of ethanol under controlled physiochemical conditions such as temperature , pH and ionic strength. The fractionation products as well as the resulting fraction II were tested and analyzed. Results The results demonstrate that the modified procedure used can result in a pure fraction II with high yield . The procedure was also suitable for all other plasma proteins. The purified fraction II contained acceptable PKA levels according to specifications of pharmacopoeia. The protein structure was also within normal limits. The repeatability of the modified procedure reported was acceptable. Conclusions The fraction II obtained in the modified Cohn procedure was a suitable intermediate product to be used in production of intravenous immunoglobulin . The PKA levels as well as the protein aggregation were minimal , and the quality of fraction II was standard . The results showed that the present modified Cohn procedure can be easily scaled up to industrial and semiindustrial levels. The resulting fraction II can be used as an intermediate in production of IVIg.