پديد آورندگان :
گلستاني، رضا دانشگاه تربيت مدرس , موذني، محمد مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران , پورفتح اله، علي اكبر مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران , حميدپور، لطيف مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران , شرفي، مجتبي مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران , عطارچي، زهره مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران , حاجي بيگي، بشير مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران , توسلي، فرزانه مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران , ريوندي، سعيد مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران
كليدواژه :
سرم انساني , كشت سلول , كينتيك رشد , گروه‌هاي خوني , تحليل عاملي
چكيده فارسي :
سابقه و هدف
دست‌يابي به منابع جايگزين سرم جنين گاو به عنوان ماده مغذي كشت سلول به علت كمبود اين نوع سرم و نيازهاي متفاوت سلول‌هاي مختلف همواره مورد بررسي مي باشد . اين مطالعه به تهيه مواد مغذي جانشين سرم جنين گاو و بررسي اثر آن‌ها بر رشد سلول‌ها و ترشح آنتي‌بادي‌هاي منوكلونال توسط دودمان‌هاي سلولي هيبريدومايي پرداخته‌است.
مواد وروش‌ها
مطالعه انجام شده از نوع تجربي بود. پلاكت‌هاي تاريخ گذشته با گروه‌هاي مختلف به منظور استخراج عوامل رشد موجود در آن‌ها مورد استفاده قرار گرفتند. پلاسما با گروه AB نيز به سرم تبديل شد و اثر آن با محيط‌هاي حاوي سرم جنين گاو، هيپوگزانتين ـ تيميدين (HT) و1640 RPMI مورد مقايسه قرار گرفت. شاخص‌هاي رشد مورد ارزيابي شامل شمارش ابتدايي سلول‌ها، Confluency (ميزان پر شدن چاهك) روزانه و تيتراسيون آنتي‌بادي‌هاي منوكلونال آنتي A و آنتي B گروه‌هاي خوني بودند. آناليز آماري شامل آزمون t تك نمونه‌اي، برازش منحني رگرسيون چندگانه لگاريتمي و تحليل عاملي منحني‌هاي رشد توسط نرم‌افزار 12 SPSS انجام شد.
يافته‌ها
چهار ماده مغـذي سـرم AB انسانـي (AB) ، سرم جنين گاو (FCS) ، عصاره پلاكتي انسان (PLT) و مخلوط AB و (PLT (ABP جهت رشد سلول‌هاي هيبريدومايي موشي توليدكننده آنتي‌سرم‌هاي گروه‌هاي خوني A و B مورد ارزيابي قرار گرفتند و با شاخص‌هاي رشد در محيط پايه 1640 RPMI مقايسه شدند. بيشترين اثر مثبت بر رشد به ترتيب نزولي عبارت بود از: 1- 5% ABP ، 2- 10% FCS ، 3- 10% ABP ، 4- 5% AB ، 5- 10% AB ، 6- 5% PLT ، 7- 20% ABP ، 8- 10% PLT ، 9- 20% PLT ، 10- هيپوگزانتين ـ تيميدين و تنها 20% AB مانع رشد گرديد. تيتر آنتي A و آنتي B ايجاد شده توسط هيبريدوم‌ها در مقادير 5 و 10 درصد از PLT ، AB و مخلوط اين دو (ABP) نسبت به FCS 5 تا 10 درصد به ترتيب نزولي به صورت زير به دست آمد: 1- 5% PLT ، 2- 10% PLT ، 5% ABP ،10% ABP ، 10% AB ، 3- 5% AB .
نتيجه گيري
به طور كلي FCS داراي بيشترين اثر در شيب تكثير و مرگ و كمترين اثر در مرحله ثبات منحني رشد سلول‌ها مي‌باشد لذا جهت تكثير سلول‌ها در شمارش پايين مناسب به نظر مي‌رسد. سرم AB ، عصاره پلاكتي و مخلوط اين دو در مقادير مناسب داراي شيب كمتر تكثير نسبت به FCS بوده و باعث طولاني شدن مرحله ثبات و كاهش شيب مرگ مي‌گردند (اين مواد در غلظت‌هاي بالا باعث مرگ سلول‌ها مي‌شوند). بنابراين ممكن است جهت كشت سلول در سيستم‌هاي ممتد كشت مناسب باشند.
چكيده لاتين :
Background and Objectives
Providing fetal calf serum (FCS) alternatives as cell culture supplements is an important field
of research to compensate for the FCS supply shortage.This study focused on preparation of
fetal calf serum alternatives and their effects on growth and secretion of hybridoma cell lines.
Materials and Methods
Outdated human platelet units undergo extraction for its growth factors to be obtained. Human
AB blood group plasma was also converted to serum and its growth effect was compared to
FCS, hypoxanthine-thymidine (HT) and RPMI1640 as cell culture media and supplement. Cell
growth indices were preliminary counting of cells , confluency as surface area of plates filled
with cells, and titration of monoclonal anti-A and anti-B blood group antibodies collected from
cultured mouse hybridoma cells. Statistical analysis including one sample t-test, logarithmic
multiple regression curve fit, and factor analysis was done by SPSS v12 software.
Results
The four nutritional supplements of (1) human serum AB (AB), (2) human platelet extract
(PLT), (3) equal mixture of AB & PLT (ABP), and (4) fetal calf serum as cell culture were
examined on mouse hybridoma anti-A and anti-B monoclonal antibody producer cell lines for
cell growth indices and compared with the same indices on RPMI1640 media. The growthstimulating
effects in descending order of values were (1) ABP5% , (2) FCS10% , (3)
ABP10% , (4) AB5% , (5) AB10% , (6) PLT5% , (7) ABP20% , (8) PLT10% , (9) PLT20%,
and (10)HT; but AB20% inhibited growth of mentioned hybridoma cell lines. The titer of anti-
A and anti-B monoclonal antibodies produced by cultured hybridoma on 5 and 10 percent
concentration of AB , PLT and ABP compared to FCS5-10% at descending order were (1)
PLT5%, (2) PLT10% , ABP5% , ABP10% , AB10%, and (3) AB5%.
Conclusions
In general FCS had the following effects on curves of cell growth: (1) the highest increase on
slope of multiplication (ascending) phase, (2) the highest increase on slope of death
(descending) phase, and (3) the lowest duration of stationary phase. Then, FCS can be
appropriate for growth of cells at initial low cell count. Human serum AB, human platelet
extract, and equal mixture of both at optimum concentrations (these supplements at high
concentrations killed cells) compared to FCS showed (1) decreased slope of multiplication
phase, (2) decreased slope of death phase, and (3) increased duration of stationary phase.
Thus, AB and PLT may be suitable for continuous cell culture systems in which cell survival
during longer times is required. Factor analysis was introduced as a model to evaluate kinetics
of cell growth at different supplements
