اثر مهاركننده تلومراز MST-312 بر آپوپتوز رده سلولي لوسمي لنفوبلاستيك حاد (NALM-6)

The effect of telomerase inhibitor MST-312 on apoptosis of acute lymphoblastic leukemia cell line NALM-6

سابقه و هدف در حالي كه تلومراز در 90%-85% سرطان‌ها از جمله در لوسمي لنفوبلاستيك حاد بيان مي‌شود، در سلول‌هاي طبيعي بيان ناچيزي داشته و مهار آن مي‌تواند يك رويكرد درماني هدفمند براي درمان سرطان باشد. هدف از اين مطالعه، بررسي اثر مهاركننده تلومراز MST-312 بر آپوپتوز سلول‌هاي NALM-6 بود. مواد و روش‌ها در اين مطالعه تجربي، سلول‌هاي NALM-6 با غلظت‌هاي مختلف MST-312 تيمار شدند. سپس در زمان‌هاي مختلف زنده ماني سلولي با آزمون تريپان‌بلو، فعاليت متابوليك سلولي با روش رنگ سنجي MTT ، آپوپتوز سلولي به روش فلوسيتومتري با استفاده از اتصال به آنكسين 7AAD/V- و آپوپتوز در سطح ژن با بررسي بيان ژن‌هاي Bax و Bcl-2 مورد بررسي قرار گرفت. يافته‌ها بيش از 50% كاهش در زنده‌ماني سلول‌هاي تيمار شده با غلظت 8 ميكرومولار MST-312به مدت 48 ساعت مشاهده شد. مقادير ميانگين و انحراف معيار درصد زنده‌ماني در زمان‌هاي صفر و 72 ساعت به ترتيب 100% و 2/5% ± 93/5% به دست آمد. فعاليت متابوليك سلولي پس از تيمار 48 ساعته در غلظت‌هاي 2، 4 و 8 ميكرومولار به ترتيب 6%، 19/69% و 56/9% كاهش يافت. مواجهه 48 ساعته سلول‌هاي NALM-6 با غلظت 4 ميكرو مولار MST-312 ، منجر به افزايش20% در آپوپتوز سلولي، افزايش 2/11 برابري بيان ژن Bax و كاهش0/61 برابري بيان ژن Bcl-2 گرديد. نتيجه گيري MST-312 با مهار تلومراز و القاي آپوپتوز در رده سلولي لوسمي لنفوبلاستيك حاد NALM-6، مي‌تواند به عنوان كانديدي جديد براي درمان لوسمي لنفوبلاستيك حاد پيشنهاد شود.

Background and Objectives There have been continuous efforts in telomerase-targeted therapy for cancer treatment because telomerase expression is significantly increased in about 85- 90% of human cancers while its expression is usually silenced in normal cells. Materials and Methods Throughout this experimental study, NALM-6 cells were treated with different concentrations of telomerase inhibitor, MST-312 at different times. Then, cell viability and metabolic activity were evaluated by trypan blue and MTT assays; cell apoptosis was also evaluated by flow cytometry using Annexin V Apoptosis Detection Kit. In addition, the expression of BAX and BCL2 genes was evaluated in the treated cells using Quantitative Real-time PCR. Results A dose-and time-dependent decrease was observed in the viability of NALM-6 cells after exposure with different concentration of MST-312. Over 50% decrease was observed in the viability of the cells treated with 8 μM of MST-312 after 48 h. The cytotoxic effect of MST- 312 was dose- dependent, with approximately 6, 19.69 and 56.9% reduction in metabolic activity of NALM-6 cells after 48 h exposure with 2, 4, and 8 μM of MST-312, respectively. Approximately 20% apoptosis was observed in NALM-6 cells treated with 4μM of MST-312 after 48 h. Gene expression analysis also showed that 4μM of MST-312 led to upregulation of BAX and downregulation of Bcl-2 genes Conclusions Inhibition of telomerase activity by MST-312 can be proposed as a new candidate for the treatment of acute lymphoblastic leukemia