تشخيص مولكولي ذرت هاي تراريخته براساس پيشبر P35S

PCR detection of transgenic maize on the basis of P35S

در دو دهه ي اخير مهندسي ژنتيك با استفاده از علم بيوتكنولوژي باعث توليد محصولات تراريخته درجهان شده است. آمار رو به رشد سطح كشت محصولات تراريخته در سرتاسر دنيا حاكي از اهميتويژه ي تراريخته ها و افزايش استفاده ي عموم مردم از اين مواد غذايي است. ذرت يكي از مهمترينمحصولات تراريخته است كه در بسياري از كشورها به ميزان زيادي كشت و مصرف ميشود. هدف ازاين پژوهش شناسايي ذرت هاي تراريخته با استفاده از روش مولكولي حساس و اختصاصي واكنشزنجيرهاي پليمراز (پي.سي.آر) است كه قابليت جداسازي موادغذايي تراريخته از غيرتراريخته را دارااست. اين پژوهش انجام شده با هدف تشخيص ذرت هاي تراريخته در سبدكالاي مصرف كنندگانايراني بر پايه ي (پي.سي.آر) و آغازگر اختصاصي P35S است. در پژوهش هاي پيشين در ايران چندنمونه ذرت مشخص يا وارداتي در ايران مورد بررسي قرار گرفته بود. در اين پژوهش سه نمونه يتراريخته ذرت از گمرك شيراز تهيه و دي.ان.ا سي وهفت نمونه ي ذرت جمع آوري شده ازبازارمصرف هفت شهر بزرگ و شش نمونه ذرت جهادكشاورزي، بهروش استاندارد CTAB)ستيل تري متيل آمونيوم برومايد) استخراج شد. آزمون پي.سي.آر شناسايي ذرت با استفاده از ژنبومياينورتاز( IVRكه در تمام ارقام ذرت وجود دارد) انجام شد. جهت شناسايي ذرت هاي تراريختهآزمون پي.سي.آر براساس پيشبر ( P35Sآغازگر اختصاصي CaMV 35sموجود اكثر وكتورها) باآغازگرهاي اختصاصي P35S2 و P35S1 بهينه شد. محصول IVR و P35S جهت تعيين توالي و تهيهكنترل مثبت كلون شد. آزمون پي.سي.آر ژن IVR و پيشبر P35S بر روي نمونه ها بهينه سازي وآمپليكون 226 bp و 195 bp به ترتيب تكثير شد. هر دو محصول پي.سي.آر به روش T/A Cloningوبا استفاده از پلاسميد pTZ57R و ميزبان JM107E.coli كلون شد. از ميان چهل و شش نمونه ذرتجمع آوري شده از بازارمصرف، گمرك و جهادكشاورزي 100درصد به لحاظ ژنبومي اينورتاز و 56,5درصد ( 26عدد) از نمونه ها به لحاظ اگزوژن P35S داراي جواب مثبت بودند. اين پژوهش نشانميدهد كه درصدبالايي از ذرت هاي مصرفي در بازار ايران براساس واكنش زنجيرهاي پليمرازتراريخته است. با اين وجود هيچ اقدامي جهت برچسب گذاري و آگاهي مصرف كننده صورت نگرفتهاست