همسانه سازي و انتقال آنزيم T7RNA پليمراز باكتريوفاژ T7 به توتون

Cloning and Transformation of Bacteriophage T7 RNA Polymerase to Tobacco

كشاورزي مولكولي به توليد پروتيين هاي دارويي و آنزيم هاي صنعتي توسط گياهان از طريق مهندسي ژنتيك اطلاق مي شود. آنزيم T7RNA پليمراز يكي از مهمترين آنزيم هاست كه به طور وسيعي در زمينه هاي مختلف بيوتكنولوژي و زيست شناسي سلولي و مولكولي، از قبيل سنتز و مطالعه ساختار و عملكرد RNA ها در شرايط آزمايشگاهي استفاده مي شود. RNAهاي سنتز شده در شرايط آزمايشگاهي در هيبريداسيون، ريزآرايه، آزمايشات RNAi و RNA آنتي سنس كاربرد دارد. اين آنزيم همچنين در سيستم هاي بياني وابسته به پيشبر و خاتمه دهنده T7 كاربرد فراوان دارد. آنزيم T7RNA پليمراز يك آنزيم باكتريوفاژي بوده و فعاليت اصلي آن در سيتوپلاسم مي باشد. تحقيق حاضر جهت همسانه سازي، انتقال ژن آنزيم T7RNA پليمراز به هسته سلولهاي يوكاريوتي و توليد آن در گياه توتون انجام گرفت. آغازگرهاي مناسب از روي توالي ژن T7RNA پليمراز به همراه توالي هاي مناسب براي آنزيم هاي برشي، طراحي و ژن T7RNA پليمراز مورد نظر پس از جداسازي در ناقل بياني pCAMBIA1304 همسانه سازي شد. به منظور اطمينان از همسانه سازي، سازه تهيه شده با استفاده از PCR، هضم آنزيمي و توالي يابي بررسي شده و همرديفي آن در بانك اطلاعاتي اسيدهاي نوكلييك تاييد گرديد. سپس، سازه نوتركيب به كمك سويه LB4404 آگروباكتريوم به گياهان توتون منتقل و گياهان تراريخته بر روي محيط هاي كشت انتخابي حاوي آنتي بيوتيك هاي هيگرومايسين و سفوتاكسيم، باززا شدند. حضور و بيان ژن T7RNA پليمراز در گياهان تراريخته با روش هاي PCR و RT- PCR تاييد شد.