تغيير بيان ژن هاي دخيل در لانه گزيني در سلول هاي استرومايي آندومتر انساني كشت شده در حضور هورمون هاي تخمداني

Alteration of Genes Expression Related to Implantation in Human Endometrial Stromal Cells Cultured in the Presence of Ovarian Hormones

هدف: هدف از اين مطالعه تجربي بررسي تأثير هورمون هاي تخمداني بر بيان ژن هاي دخيل در لانه گزيني در سلول هاي استرومايي آندومتر انسان در محيط كشت بود. مواد و روش ها: پس از تأييد نرماليتي بافت هاي آندومتر حاصل از هيسترسكوپي با رنگ آميزي هماتوكسيلين و ائوزين، سلول هاي آندومتر به كمك كلاژناز تيپ 1 جداسازي و از فيلترهايي به ابعاد 100 و 40 ميكرومتر عبور داده شدند. سلول هاي استرومايي حاصل در محيط 12 - DMEM / F تا پاساژ 4 كشت شد و سپس به مدت 7 روز در دو بخش مطالعه شد: گروه كنترل (بدون هورمون) و گروههاي آزمون با غلظت هاي متفاوت استروژن (E2)؛ 0/3، 0/7 و 1 نانو مول بر ليتر و غلظت ثابت پروژسترون (P4)؛ 63/5 نانومول بر ليتر پس از كشت حيات و تكثير سلول ها با رنگ آميزي دوگانه پروپيديوم آيودايد و آكريدين اورنج و آزمون MTT و بيان ژن هاي دخيل در لانه گزيني؛ اينتگرين هاي av و 63، گيرنده عامل مهاركننده لوسمي و گيرنده اينترلوكين 1 با روش real time RT- PCR ارزيابي و تجزيه و تحليل داده ها با استفاده از نرم افزار SPSS انجام شد. نتايج: 99/9 درصد از سلولها در همه گروهها زنده بودند. تكثير سلول ها در گروه تيمار شده با دوز 0/3 نانومول بر ليتر نسبت به گروه هاي كنترل و تيمار شده با دوز 0/7 نانو مول بر ليتر افزايش معني دار (0/040/02). نتيجه گيري: استفاده همزمان استروژن و پروژسترون در كشت سلول هاي استرومايي آندومتر مي تواند بر تكثير و بروز برخي از ژن هاي لانه گزيني مؤثر باشد.

Objective: This experimental study evaluatedthe effect of ovarian hormones on the expression of genes related to implantation in human endometrial stromal cells in vitro. Methods: After confirmation ofnormal endometrial tissue collected from hysteroscopy according to hematoxylin and eosin staining, we isolated the endometrial cells with collagenase type 1. The cells were passed through 100 and 40 μm filters. We cultured the collected stromal cells in DMEM/F-12 medium to the fourth passage. Passage-4 cells were examined for 7 days in two groups - control (without hormones) and experimental groups with different concentrations of estrogen (E2; 0.3, 0.7 and 1 nmol/L) and a constant concentration of progesterone (P4; 63.5 nmol/L). After culture, the cell viability, proliferation and the expression of genes related to implantation, αv and β3 integrins, leukemia inhibitory factor receptor (LIFR), and interleukin-1 receptor (IL-1R) were assessed by staining with propidium iodide and acridine orange, the MTT assay, and real time RT-PCR.The data were analyzed using SPSS software. Results: There were 99.9% viable cells in all groups. Cell proliferation increased significantly in the 0.3 nmol/L treated group compared with the control group and the group treated with 0.7nmol/L (P≤0.04). However, the group treated with 1 nmol/L did not significantly change compared to the other groups. In contrast to IL1-R and LIFR, expressions of the αv and β3 integrins significantly increased in the 0.3 nmol/L treated group compared to the control (P≤0.02). Conclusion: The combined use of estrogen and progesterone in an endometrial stromal cell culture had an effect on the proliferation and expression of some genes related to implantation.