سطح بياني miR-9 در اگزوزوم‌هاي مشتق از سلول‌هاي اپي‌تليال كارسينوماي تخمدان و تاثير تيمار اگزوزومي بر بيان ژن VEGF در سلول‌هاي اندوتليال وريد بند ناف انساني

Expression Level of miR-9 in Exosomes Derived from Ovarian Epithelial Carcinoma Cells and the Effects of Exosome Treatment on VEGF Expression in Human Umbilical Vein Endothelial Cells

اهداف: اگزوزوم‌هاي مشتق از سلول‌هاي توموري منبعي غني از ميكرو RNA‌‌ها هستند ولي عملكرد زيستي آنها در سلول‌هاي پذيرنده به‌خوبي مشخص نشده است. هدف مطالعه حاضر بررسي سطح بياني miR-9 در اگزوزوم‌هاي مشتق از سلول‌هاي اپي‌تليال كارسينوماي تخمدان و تاثير تيمار اگزوزومي بر بيان ژن فاكتور رشد اندوتليال عروقي (VEGF) در سلول‌هاي اندوتليال وريد بند ناف انساني بود. مواد و روش‌ها: در مطالعه تجربي حاضر اگزوزوم‌ها از محيط كشت سلول‌هاي اپي‌تليال كارسينوماي تخمدان جداسازي شده، اندازه و شكل ظاهري آنها به‌وسيله ميكروسكوپ الكتروني نگاره بررسي شد. اگزوزوم‌هاي تخليص‌شده با رنگ فلورسنت PKH نشاندار، سپس سلول‌هاي اندوتليال وريد بند ناف انساني با اگزوزوم‌هاي نشاندارشده تيمار و جذب سلولي توسط ميكروسكوپ فلورسنت ارزيابي شد. به‌وسيله PCR كمي، بررسي سطوح بياني miR-9 و ژن VEGF صورت گرفت و آزمون T جفتي براي تحليل داده‌ها به‌كار رفت. يافته‌ها: اگزوزوم‌ها به‌شكل وزيكول‌هايي كروي‌شكل با قطري بين 100-50 نانومتر مشاهده شدند. اگزوزوم‌هاي نشاندار در سيتوپلاسم سلول‌هاي اندوتليال مكان‌يابي شدند. اين امر حاكي از قابليت جذب اگزوزوم‌هاي مشتق از سلول‌هاي توموري توسط سلول‌هاي اندوتليال بود. هم در سلول‌هاي توموري تخمدان و هم در اگزوزوم‌هاي مشتق از آنها، miR-9 بيان شد. سطح بياني miR-9 در اگزوزوم‌ها بيشتر و اگزوزوم‌هاي مشتق از سلول‌هاي توموري تخمدان منجر به افزايش معني دار بيان سطح رونوشت ژن VEGF در سلول‌هاي اندوتليال شدند. نتيجه‌گيري: اگزوزوم‌هاي مشتق از سلول‌هاي توموري تخمدان موجب افزايش سطح بيان رونوشت ژن فاكتور رشد اندوتليال عروقي در سلول‌هاي اندوتليال مي‌شوند و احتمالاً انتقال اگزوزومي miR-9 مي‌تواند مكانيزمي براي چگونگي افزايش بيان فاكتور رشد اندوتليال عروقي در روند رگ‌زايي تومور در سلول‌هاي اندوتليال باشد.

Aims Exosomes are considered as a protective and enriched source of shuttle microRNAs. However, the precise biological mechanism of exosomal microRNAs in recipient cells remains to be further clarified. The aim of this study waz to investigate Expression level of miR-9 in exosomes derived from ovarian epithelial carcinoma cells and the effects of exosome treatment on Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) expression in human umbilical vein endothelial cells. Materials & Methods Exosomes were purified from the conditioned medium of ovarian epithelial carcinoma cells. Exosome size and morphology were examined by a scanning electron microscope. Purified exosomes were labeled with PKH26 red fluorescent labeling kit, then labeled exosomes were incubated with human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) for 12h at 37°C, and the cellular uptake was monitored using an inverted fluorescence microscope. Expression levels of miR-9 and VEGF were measured by real-time PCR. Paired t-test was used for data analysis. Findings The purified MSCs-derived exosomes had a spherical shape with a diameter between 50 to 100nm. PKH26-labeled exosomes can be taken up by SKOV3 tumor cells with high efficiency. The expression levels of miR-9 in both ovarian tumor cells and their exosomes. Exosomes derived from ovarian tumor cells caused increased expression of VEGF in exosometreated endothelial cells. Conclusion Exosomes derived from ovarian tumor cells led to increased expression of VEGF in endothelial cells. As miR-9 was enriched in both ovarian tumor cells and their exosomes, it seems that exosomal transfer of miR-9 may affect the expression of VEGF in endothelial cells during tumor angiogenesis.