پديد آورندگان :
حضرتي تپه، خسرو دانشگاه علوم پزشكي اروميه - دانشكده پزشكي - مركز تحقيقات سلولي و مولكولي و گروه انگل شناسي و قارچ شناسي , يحيي پور، توحيد دانشگاه علوم پزشكي اروميه - بيمارستان سيد الشهدا , موسوي، جليل دانشگاه علوم پزشكي اروميه - بيمارستان طالقاني - گروه عفوني , محمدزاده، حبيب دانشگاه علوم پزشكي اروميه - دانشكده پزشكي - گروه انگل شناسي و قارچ شناسي , ديبا، كامبيز دانشگاه علوم پزشكي اروميه - دانشكده پزشكي - گروه انگل شناسي و قارچ شناسي , رحيمي نژاد، علي دانشگاه علوم پزشكي اروميه - دانشكده پزشكي - گروه انگل شناسي و قارچ شناسي
كليدواژه :
پنوموسيستيس كاريني , رت , نمونه هاي تشخيصي , روش هاي رنگ آميزي
چكيده فارسي :
پيش زمينه و هدف
پنوموسيستيس كاريني يك ميكروارگانيسم خارج سلولي و موجودي فرصت طلب است كه در شرايط طبيعي ، بدن مانع تهاجم آن مي گردد ولي در شرايط ضعف يا نارسايي ايمني مثلا در جريان بيماري ايدز، هوچكين و ساير بيماري هاي تضعيف كننده دستگاه ايمني به بدن تهاجم كرده و عفونت ايجاد مي كند. هدف اين مطالعه مقايسه لام هاي تماسي و برشهاي بافتي با استفاده از روش هاي رنگ آميزي متانامين سيلور، گيمسا، گرام وايگرت، پاپا نيكولائو و هماتوكسيلين ائوزين ازنظر زمان رنگ آميزي، سهولت، هزينه، قابليت دسترسي به مواد و روش ها، شناسايي اشكال مختلف ميكروارگانيسم پنوموسيستيس كاريني و ويژگي و توانايي اين روش ها در تشخيص پنوموسيستيس كاريني مي باشد.
مواد و روش كار
براي ايجاد پنوموسيستوزيس در رت هاي نژاد ويستار به مدت 12-10 هفته و هر هفته 2 بار به ميزان 5/0 سي سي دگزامتازون زير جلدي تزريق شد كه بعد از ايجاد بيماري از ريه رت ها لام هاي گسترش تماسي و همچنين قطعه هايي در فرمالين درصد10 جهت لام هاي برش بافتي استفاده شد سپس لام هاي موجود با روش هاي رنگ آميزي متان امين سيلور، گرام وايگرت، پاپانيكولائو، گيمسا، هماتوكسيلين ائوزين رنگ آميزي شده و ازلحاظ زمان رنگ آميزي، سهولت، هزينه و قابليت دسترسي آن ها به يكديگر مقايسه شدند. همچنين ازنظر ويژگي و توانايي روش هاي تشخيص ميكروارگانيسم در برش هاي بافتي و گسترش هاي تماسي نيز با همديگر مقايسه شدند.
يافته ها
روش هاي رنگ آميزي گيمسا و پاپانيكولائو قادر به رنگ آميزي اجسام داخل كيست مي باشند و ديواره كيست را رنگ نمي كنند. روش هاي رنگ آميزي متانامين سيلور و گرام وايگرت ديواره ي كيست ها را رنگ آميزي مي كنند. گيمسا راحت ترين، كم هزينه ترين و سريع ترين روش جهت تشخيص ميكروارگانيسم مي باشد و در مقابل متانامين سيلور، پرهزينه ترين و زمان برترين روش جهت تشخيص مي باشد. همچنين روش رنگ آميزي متانامين سيلور، گرام وايگرت، پاپانيكولائو قادر به رنگ آميزي و تشخيص پنوموسيستيس كاريني در برش هاي بافتي و گسترش هاي تماسي مي باشند ولي گيمسا فقط قادر به تشخيص ميكروارگانيسم در گسترش هاي تماسي بوده و هماتوكسيلين ائوزين قادر به تشخيص ميكروارگانيسم در هيچ كدام از نمونه ها نمي باشد.
بحث و نتيجه گيري
در ميان رنگ آميزي هاي انجام شده، رنگ آميزي پاپانيكولائو و گيمسا به علت اين كه اجسام داخل كيست را به صورت واضح رنگ كرده و همچنين تعداد كمي و يا هيچ كدام از مخمرها با اين روش ها رنگ نمي گيرند، نسبت به رنگ آميزي گرام وايگرت كه ديواره كيست ميكروارگانيسم را رنگ كرده و مخمرها نيز با اين روش رنگ مي گيرند ويژگي بالاتري جهت تشخيص پنوموسيستيس كاريني دارند. متانامين سيلور در تشخيص پنوموسيستيس كاريني در نمونه هاي برونكوآلوئلار لاواژ، خلط و بيوپسي استاندارد طلايي مي باشد، ولي در نمونه هاي رنگ آميزي شده معمولا اندازه كيست هاي پنوموسيستيس كاريني تقريبا هم اندازه مخمرها مي باشد و همچنين مخمرها مانند كيست هاي پنوموسيستيس كاريني رنگ مي گيرند احتمال مثبت كاذب در تشخيص نمونه ها وجود دارد، درنتيجه توصيه مي شود جهت تشخيص دقيق تر ميكروارگانيسم در نمونه هاي به دست آمده همراه با رنگ آميزي متانامين سيلور حتما از رنگ آميزي گيمسا كه به جاي ديواره كيست ها اجسام داخل كيست را رنگ مي كند نيز استفاده شود.
چكيده لاتين :
Background & Aims: Pneumocystis carinii is an opportunist extracellular microorganism. The body can defend
itself against it in natural conditions. But it can cause an infection in immunodificient conditions such as HIV,
Hodgkins and other immunosuppressed diseases. The aim of this study was to apply a comparison of different
staining methods such as Methenamine silver, Giemsa, Gram - Weigert, Papanicolaou and Hematoxylin eosin
stains in terms of staining times, easiness, cost and availability of material and methods, detection of P. carinii,
different forms and capability of this methods in detection of P. carinii in impression slides, and tissue slices of
rats lungs.
Materials & Methods: In order to induce of Pneumocystis pneumonia, the Sprague Dawley rats were injected
0.5cc of dexamethasone subcutaneously twice a week over a 10-12 weeks, after induce pneumonia we removed
the lungs and made impression slides and pieces of lung was put in 10% formalin to make tissue slides. After
that the slides stained by Methenamine silver, Gram Weigert, papanicolaou, Giemsa and Hematoxylin eosin, and
compared them in terms of staining time, easiness, cost and availability. In addition, we compared the capability
of different methods to detect the microorganism in tissue preparation slices and impression slides.
Results: Giemsa and papanicolaou are capable to stain the intra cyst bodies but can’t stain the cysts wall.
Methenamine silver and Gram Weigert stain the cysts wall. Giemsa is fastest, cheapest and the most easy method
to stain, vs. methenamine silver is expensive, difficult and takes long time to do. Methenamine silver papanicolaou,
Gram Weigert can detect P. carinii in both tissue slice and smears but Hematoxylin eosin can’t detect either slices
or impression slides. Giemsa only detects microorganism in impression slides.
Conclusions: In these staining methods, Papanicolaou and Giemsa have more specificity than Gram Weigert to
detect the P. carinii in specimens, because these staining method don’t specify the wall of cysts together with
yeasts, because of this the wrong diagnosis with Giemsa and Papanicolaou is less than Gram Weigert.
Methenamine silver is golden standard method to detect P. carinii but it stains the yeasts like P. carinii because the
yeasts are similar to cysts in shape and color when we stain with methenamine silver. Because of this we conclude
that Methenamine silver is suitable and useful for demonstration of P. carinii cysts but it is better to be used
together with Giemsa, because Giemsa can stain the intra cyst bodies so the diagnosis of pneumocystis pneumonia
becomes easy with these methods together.
