بررسي آلودگي به ژيارديا و كريپتوسپوريديوم و تعيين ژنوتيپ ژياردياي شايع در كودكان استان البرز

A Survey on Giardia and Cryptosporidium Infection and Genotyping Common Giardia in Children in Alborz Province

اهداف: ژيارديا و كريپتوسپوريديوم، تك‌ياخته‌هاي روده‌اي بيماري‌زا هستند كه انسان و حيوانات مختلف از قبيل پستانداران و پرندگان را در تمام دنيا آلوده مي‌كنند. هر دو تك‌ياخته از عوامل ايجادكننده اسهال و اختلال‌هاي تغذيه‌اي در جوامع انساني هستند. هدف اين پژوهش، بررسي آلودگي به ژيارديا و كريپتوسپوريديوم و تعيين ژنوتيپ ژياردياي شايع در كودكان استان البرز بود. مواد و روش‌ها: در پژوهش توصيفي- مقطعي حاضر، 160 نمونه مدفوع كودكان 10-2ساله استان البرز، ابتدا با روش زيل‌نلسون اصلاح‌شده براي كريپتوسپوريديوم و تري‌كروم براي ژيارديا، رنگ‌آميزي و از لحاظ آلودگي به اين دو تك‌ياخته بررسي شدند. سپس براي تعيين ژنوتيپ، نمونه‌هاي مثبت به‌وسيله روش مولكولي مورد مطالعه قرار گرفتند. ژيارديا دئودناليس براساس ژن TPI و كريپتوسپوريديوم بر اساس ژن 18SrRNA با روش Nested PCR و براي تعيين گروه‌ها و زيرگروه‌ها به‌ وسيله تعيين توالي بررسي شدند. براي رسم درخت فيلوژني از نرم‌افزار MEGA 7 و الگوريتم Maximum liklihood با 1000 تكرار استفاده شد. يافته‌ها:كريپتوسپوريديوم در 4 نمونه (2/50%) و ژيارديا در 15 نمونه (9/37%) با روش رنگ‌آميزي يافت شدند. در هيچ نمونه‌اي از افراد داراي علايم باليني اسهال، انگل كريپتوسپوريديوم مشاهده نشد. از مجموع چهار ايزوله ژيارديا دئودناليس، يك ايزوله BIV، دو ايزوله BIII و يك ايزوله AII تشخيص داده شد كه بعضي از آنها مربوط به كودكان بدون علايم باليني بود و درخت فيلوژني رسم‌شده آن را تاييد كرد. تلاش براي تعيين ژنوتايپ كريپتوسپوريديوم به نتيجه نرسيد. نتيجه‌گيري: شناسايي ژنوتيپ‌هاي AII، BIV و BIII در كودكان 10-2ساله استان البرز به‌ترتيب نشان‌دهنده چرخه انتقال آنتروپونوتيك و آنتروپوزئونوتيك عفونت ژيارديا در اين استان است.

Aims Giardia and Cryptosporidium are enteric protozoans, causing gastrointestinal infection in humans and animals such as mammalian and birds worldwide. Both protozoans causae diarrhea and nutritional disorders in human. The present research aimed at investigating the Giardia and Cryptosporidium infection and genotyping common Giardia in children in Alborz province. Materials & Methods In this descriptive cross sectional study, 160 stool samples of children aged 2-10 years old in Alborz province were first stained with the modified Ziehl-Neelsen staining method for Cryptosporidium and trichrome staining method for Giardia, and they were evaluated for infection with these two protozoans. Then, positive samples were analyzed by molecular method to genotype. Giardia duodenalis based on the TPI gene and Cryptosporidium based on the 18SrRNA gene were investigated by Nested PCR and to determine the groups and subgroups by sequencing. For drawing phylogenetic tree, MEGA 7 software and Maximum liklihood algorithm with 1000 replications were used. Findings Cryptosporidium was detected in 4 (2.50%) samples, while Giardia was detected in 15 (9.37 %) samples with staining method. In no sample of patients with clinical symptoms of diarrhea, Cryptosporidium was observed. Among 4 isolates of Giardia duodenalis, 1 BIV, 2 BIII, and 1 All isolates were detected, some of which belonged to asymptomatic children and the drawn phylogenetic tree confirmed it. Attempts to determine genotype Cryptosporidium failed. Conclusion Identification of AII, BIV, and BIII genotypes in 2-10 years old children in Alborz province indicates anthroponotic and anthropozoonotic transmission of Giardia infection, respectively, in this province.