عنوان مقاله :
راه‌اندازي و به‌كارگيري روش اليزا به‌منظور تشخيص حضور آنتي‌ژن p24 در خون افراد آلوده به HIV
عنوان به زبان ديگر :
Developing ELISA Assay to Detect HIV P24 Antigenemia
پديد آورندگان :
محبي، رضا دانشگاه تربيت مدرس - دانشكده علوم پزشكي , روانشاد، مهرداد دانشگاه تربيت مدرس - دانشكده علوم پزشكي - گروه ويروس‌شناسي پزشكي , صباحي، فرزانه دانشگاه تربيت مدرس - دانشكده علوم پزشكي - گروه ويروس‌شناسي پزشكي , مهبودي، فريدون انستيتو پاستور ايران - مركز تحقيقات بيوتكنولوژي - گروه بيوتكنولوژي
كليدواژه :
ويروس نقص ايمني انسان , آزمون اليزا , آنتي‌ژن p24 , خالص‌سازي آنتي‌بادي
چكيده فارسي :
هدف: ويروس نقص ايمني انسان، موجب اختلال و ضعف در دستگاه ايمني مي‌گردد و بنابراين فرد در برابر عفونت‌هاي فرصت‌طلب و بروز علائم بيماري ايدز حساس مي‌گردد. انتشار ويروس از طريق انتقال خون و ضرورت تشخيص آلودگي آن در بيمارستان‌ها و مراكز بهداشتي، همواره در سراسر جهان مورد توجه بوده است. روش‌هاي متنوعي به‌منظور تشخيص عفونت HIV وجود دارند. روش اليزا با توجه به مزاياي خاص خود، به‌صورت معمول در اكثر مراكز بهداشتي مورد استفاده قرار مي‌گيرد. به‌منظور كوتاه كردن دوره پنجره و همچنين تشخيص عفونت در نوزادان متولد شده از مادران آلوده، مي‌توان حضور آنتي‌ژن‌هاي HIVرا مورد بررسي قرار داد. هدف اين پژوهش، طراحي و راه‌اندازي روش كپچر اليزا براي تشخيص حضور آنتي‌ژن كپسيدp24) HIV) در خون افراد آلوده به HIV بود.
مواد و روش كار: در اين تحقيق، آنتي‌بادي پلي كلونال عليه آنتي‌ژن نوتركيب p24 ويروس HIV در خرگوش توليد و با روش‌هاي متنوع كروماتوگرافي جذبي اختصاصي IgG و آنتي‌بادي عليه p24 تخليص گرديد. آنتي‌بادي اختصاصي استخراج شده پس از تأييد، با آنزيم پراكسيداز كنژوگه و روش كپچر اليزا طراحي و راه‌اندازي شد. به‌منظور ارزيابي و تعيين حساسيت و ويژگي اين روش، نمونه‌هاي سرمي HIV مثبت‌و منفي، در مقايسه با تست استاندارد بررسي و ارزيابي گرديد.
نتايج: نتايج حاصل از اين تحقيق مشخص كرد كه روش راه‌اندازي شده را مي‌توان به‌منظور تشخيص و تأييد عفونت HIV در دوران پنجره و عفونت به كار برد. ويژگي اليزاي راه‌اندازي شده 100 درصد و حساسيت آن پس از تيمار حرارتي 96 درصد در مقايسه با كيت تجاري بود. پس از مقايسه نتايج اليزا ميان تحت تيپ‌هاي A و B ويروس، تفاوت معناداري مشاهده نگرديد.
نتيجه‌گيري: اين تست حساسيت و ويژگي بالايي براي تشخيص آنتي‌ژن ويروس دارد و همچنين داراي مزاياي زيادي، شامل مدت‌زمان نسبتاً كوتاه انجام آزمايش و توليد راحت آنتي‌بادي به ميزان كافي است. در مقايسه با روش‌هاي ديگر تشخيص، تست راه‌اندازي شده، ساده، سريع، دقيق و از نظر اقتصادي، مقرون به صرفه است. از اين روش مي‌توان براي تشخيص عفونت HIV در نوزادان متولد شده از مادران آلوده كه به دليل انتقال آنتي‌بادي مادري از جفت با روش‌هاي معمول قابل تشخيص نمي‌باشد و همچنين كوتاه كردن دوران پنجره كه عفونت قابل انتقال است، استفاده كرد
چكيده لاتين :
Introduction: Human immunodeficiency virus is the etiologic agent of immune system deficiency and the infected patients are susceptible to opportunistic infections and AIDS. Transmission of infection during blood transfusion and diagnosis of infection in hospitals and public health settings have steadily been a worldwide concern. Different techniques are now available for the diagnosis of HIV infection. ELISA detection system is used in the diagnosis of antibodies. In order to shorten the window period and detect the infection in newborn, a capture ELISA assay was developed for the diagnosis of HIV capsid or p24 antigenemia in the infected patients. Objective: The aim of this study was to establish and develop of a capture ELISA assay for diagnosis of HIV capsid antigen in serum samples of HIV positive patients. Materials & Methods: In this study polyclonal monospecific antibody against recombinant HIV p24 antigen was developed in rabbits. Then, it was purified by IgG, and p24 specific affinity chromatography. Purified antibody was confirmed and conjugated with conjugated peroxidase “HRP”. Thus, the capture ELISA was developed. To evaluate the sensitivity and the specificity of the technique, HIV positive and negative serum samples were checked and compared to the standard assay. Results: The results indicated that the developed assay could be useful for the detection and confirmation of HIV infection during the window period. The specificity of the assay was %100 and its sensitivity was %96.87. After comparison of findings among subtypes A, B and C of HIV, it was found that there was no statistically significant variation. Conclusion: The developed assay showed high sensitivity and specificity for detection of viral antigen. In addition, it is not time consuming and specific antibody production in animal model is relatively easy. In comparison to other assays, this method is easy to perform, rapid, accurate and inexpensive. The assay could be readily used for the diagnosis of HIV infection in newborns, since the maternal antibodies could pass through the placenta. Moreover, it could to shorten the window period.
عنوان نشريه :
دانشور- پزشكي
عنوان نشريه :
دانشور- پزشكي
