بررسي مولكولي كانديدا آلبيكنس جدا شده از عفونت هاي پريودنتال و تاثير عصاره جلبك سارگاسوم بر بيان ژن بيو فيلم ALS با روش Real-Time-PCR

Molecular study of Candida albicans isolated from periodontal infections and effect of Sargasum alga extract on biofilm als gene expression using Real-Time-PCR

زمينه و هدف: كانديدا، پاتوژن فرصت طلبي است كه در افراد با سيستم نقص ايمني و تضعيف شده ايجاد بيماري مي كند. بيماري هاي پريودنتال، حالت التهابي و مخرب كمپلكس دنداني لثه اي است كه رشد بيوفيلم ناشي از گونه هاي كانديدا گلابراتا، پاراپسيلوزيس و تروپيكاليس نسبت به كانديدا آلبيكنس در آن كمتر است. جلبك قهوه اي سارگاسوم به علت داشتن منشاء طبيعي نسبت به داروهاي شيميايي سازگاري بيشتري باانسان دارد و عوارض جانبي كمتري ايجاد مي كند. هدف مطالعه حاضر بررسي مولكولي گونه هاي كانديدا جدا شده از عفونت هاي پريودنتال و تاثير عصاره جلبك قهوه اي sargassum glaucescens بر بيان ژن تشكيل دهنده بيوفيلم با روش real-time-pcr بود. روش بررسي: نمونه هاي دهاني عفونت پريودنتال از بيماران مراجعه كننده جمع آوري شد. جهت ايزولاسيون گونه هاي كانديدا از نمونه ها روي محيط سابورو دكستروز آگار حاوي كلرامفنيكل (sdac) كشت شد. از كلني هاي رشد يافته با روش كيت و پرل شيشه اي استخراجdna انجام شد. كلني هاي رشد يافته با پرايمرهاي اختصاصي به روش pcr-rflp شناسايي گرديد. به منظور شناسايي بيان ژن هاي als در ايزوله هاي كانديدا استخراج rna با روش فنل كلروفرم و پرل شيشه اي و براي ارزيابي تاثير عصاره سارگاسوم گلسيسنس از دستورالعمل clsi-m27a2 استفاده شد. يافته ها: نتايج حاصل نشان داد كه ميزان بيان ژن als در عفونت پريودنتال در سنين مختلف نسبت به ساير ژن ها بيشتر است. نقش ديگر alsدر تشكيل بيوفيلم كانديدا آلبيكنس است. حداقل غلظت مهاركنندگي رشد قارچ توسط عصاره جلبك 256 ميكروگرم بر ميلي ليتر بود. سارگاسوم گلوسنس حدود 62% بيان ژن als را در نمونه هاي مورد بررسي كاهش داد.نتيجه گيري: سارگاسوم گلوسنس داراي ويژگي هاي خاص فارماكولوژيك و اثرات ضد قارچي و ضد ميكروبي قابل توجهي است. بررسي نتايج با روشreal time pcr نشان داد كه بيان ژن als در ايزوله هاي تحت مطالعه تيمار شده با عصاره جلبك سارگاسوم نسبت به ايزوله هاي تيمار نشده پايين تر بوده و نشان دهنده نقش مثبت عصاره در كاهش بيان ژن مولد بيوفيلم در ايزوله ها بود.

Candida is an opportunistic pathogen that causes illness in people with a defective or weakened condition. Infectious diseases (periodontal diseases) are inflammatory and malignant inflammation of the dental-gum complex, in which the growth of biofilms caused by Candida glabrata, Parapseilosis and Tropikalis is less than Candida albicans. Brown algae Sargasum is more compatible with human medicines due to having a natural origin than chemical drugs and has less side effects. The aim of the present study was to investigate the molecular characteristics of Candida species isolated from periodontal infections and the effect of Sargassum glaucescens extract on biofilm gene expression using Real-Time-PCR. Materials and Methods Oral samples of periodontal infection were collected from the referred patients. To isolate the candidate species, the specimens were cultured on a Sabouraud dextrose agar containing chloramphenicol (SDAc). The extracted DNA was extracted from colonies grown from Kit and Glass pearl. Grown chickens were identified by specific primers by PCR-RFLP method. In order to detect the expression of als genes in Candida isolates, RNA extraction was performed using Phenol-Chloroform and Pearl glass, and the CLSI-M27-A2 method was used to evaluate the effect of Sargasum glaucescens extract of algae. Results The results showed that the expression of als gene in periodontal infection is higher than other genes. Another role is als in the formation of Candida albicans biofilm. The minimum inhibitory concentration of fungal growth was 256 μg/ml by algae extract. Sargasum glaucescens reduced the expression of als gene expression by about 62% in the sample. Conclusion Sargasum glaucescens algae possesses specific pharmacological properties and antimicrobial and antimicrobial effects. The results of the study using Real Time PCR showed that expression of als gene in isolated studied with Sargasum algae extract was lower than untreated isolates. Thus, this indicated the positive role of treatment by sargasum glaucescens extract in reducing the expression of biofilm gene in isolates.