بررسي سينتيك آنزيمي پراكسيداز در ريشه گياه كنگر Gundelia tournefortii

Kinetic investigations of peroxidase in roots of Gundelia Tournefortii

خصوصيات سينتيكي آنزيم پراكسيداز ريشه كنگر از نظر دمايي، pH و اثر بازدارنده ها بررسي شد. بيشترين فعاليت پراكسيدازي كنگر در pH 5/5 تا 5/6 بر حسب نوع سوبسترا متغير مي­باشد. فعاليت در غلظت ثابت H2O2 با افزايش غلظت هر كدام از سوبستراهاي گاياكل، كتكول و پيروگالل افزايش يافته، طوري­كه در غلظت 22 ميلي­مولار گاياكل به بيشينه­ يعني Unit/mg. protein 4/2 مي­رسد. در غلظت ثابت گاياكل و غلظتهاي متغير H2O2 بيشينه­ي فعاليت Unit/mg protein 2 به دست آمد و Km آن 4 ميليمولار تعيين شد. در40 ميليمولار فعاليت آن به 35% بيشينه­ مي­رسد. بازدهي كاتاليتيكي پراكسيداز در غلظت ثابت گاياكل و در غلظت ثابت پراكسيد هيدروژن به ترتيب mM-1 5/0 و Unit/mg protein 5/0 محاسبه گرديد، در حاليكه بازدهي كاتاليتيك پراكسيداز ريشه در حضور كتكول و پيروگالل به ترتيب 33/0 و 66/0 محاسبه گرديد. پايداري آنزيم و بيشترين فعاليت پراكسيدازي در 40 درجه سانتي گراد حاصل شد و در گستره­ي دمايي 50 درجه و 60 درجه­ فعاليت آنزيمي با گذشت زمان كاهش يافت. سديم سيانيد در غلظتهاي كم اثر مهاركنندگي داشته و در غلظتهاي بالا فعاليت پراكسيداز را به صفر مي­رساند در حالي كه سديم آزيد براي مهار پراكسيداز به غلظتهاي بالاتري نياز دارد. IC50 در حضور سديم سيانيد 008/0 ميليمولار و در حضور سديم آزيد 4/0 ميليمولار ميباشد، يعني IC50 در حضور سديم آزيد 312 برابر IC50 در حضور سديم سيانيد است. سيانيد مهاركننده رقابتي پراكسيداز ريشه كنگر در حضور كتكول و پيروگالل و مهاركننده غير رقابتي آنزيم در حضور گاياكل است.

Kinetic properties of root of peroxidase of Gundelia tournefortii investigated at different pH, temperature and different inhibitors. Maximum activity of peroxidase achieved at pH 5.5-6 in according to type of substrate. Activity of peroxidase increased at constant concentration of H2O2 and different concentration of guaiacol, catechol and pyrogallol. The maximum activity in presence of 22mM of guaiacol was earned 2.4 Unit/mg.protein. At constant concentration of guaiacol and different concentration of H2O2, Vmax and Km were 2 Unit/mg.protein and 4 mM respectively. Activity decreased at high concentration of H2O2 so reached to 35% of Vmax at 40 mM. Catalytic efficiency of peroxidase in presence of constant concentrations of guaiacol and H2O2 calculated 0.5 and 0.5 Unit/mg protein mM-1 respectively. Stability of enzyme and maximum of activity was earned at 40 0C. Sodium cyanid and sodium azide showed inhibitory effect on activity with IC50 of 0.008 and 0.4 mM respectively. These results of inhibitors showed that inhibitory effect of Azid is 312 times of inhibitory effect of cyanide. Cyanid is competitive inhibitor of peroxidase in presence of catechol and pyrogallol and noncompetitive inhibitor of enzyme in presence of guaiacol, and Azide is noncompetitive inhibitor of peroxidase of root in gundelia tournefortii in presence of catechol and pyrogallol and uncompetitive inhibitor of enzyme in presence of guaiacol and kojic acid is uncompetitive inhibitor of peroxidase in presence of guaiacol and pyrogallol.