بررسي بيان ژن هاي IL4، TNFα، TGFβ و IFNγ در تائيد پلاريزاسيون ماكروفاژهاي M1 و M2 حاصل از كشت مونوسيت هاي انساني

Assessing the gene expression of IL4, TNFα, TGFβ and IFNγ in studying M1 and M2 macrophages derived from human monocyte

مقدمه: ماكروفاژ هاي كلاسيك (M1) و آلترناتيو (M2) عملكردهاي مختلفي را درمقابله با عفونت ها به عهده دارند.درجريان پاسخ ايمني در مقابل BCGماكروفاژهاي M1 ودربيماري هيداتيدوزماكروفاژهاي M2فعال ميشوند.درمكانيسم هاي تنظيم ايمني پلاريزاسيون اين جمعيت اساس هومئوستاز را تشكيل ميدهد. يكي از راه هاي تائيد پلاريزاسيون ،بيان سايتوكاين هاي IFNγ و TNFα براي فنوتيپ M1 و TGFβ جهت فنوتيپ M2 مي باشد. هدف از اين مطالعه بررسي بيان ژن اين سايتوكاين ها در جهت تائيد پلاريزاسيون ماكروفاژهاي تحريك شده با BCG ومايع كيست هيداتيد باروردر شرايط آزمايشگاهي بوده است.بيان ژن IL4كه اخيرا"توليدآن توسط رده منوسيتي ماكروفاژي گزارش گرديده است موردبررسي قرارگرفت. مواد و روشها: تك هسته اي هاي خون محيطي باروش بكارگيري از گراديان غلضتي فايكول تخليص وجداسازي شد. جمعيت مونوسيتي_ماكروفاژي باتكنيك چسبندگي از سلولهاي شناور در محيط كامل كشت سلول تفكيك گرديد. به مدت 8 ساعت ماكروفاژها با محرك هاي BCG و مايع كيست هيداتيد بارور تيمار گرديد. به منظور تاييد پلاريزاسيون ماكروفاژي ، بيان سايتوكاينهاي اختصاصي با استفاده از RT-PCR و بررسي توالي تكثير يافته، در مقايسه با نمونه كنترل مورد مقايسه قرار گرفت. نتايج: تكثير ژن هاي اختصاصي سايتوكاين هاي هر گروه نشان دهنده تائيد فرايند پلاريزاسيون بود.ماكروفاژهاي بامحركBCGبيان افزايش داشته اي رااز IFN-γو TNF-αنشان دادند.درگروه باتحريك مايع كيست بارور هيداتيدبيان ژنTGF-βمشهود بود.ژن IL4نيزدراين جمعيت ملاحظه گرديد. همچنين عدم مشاهده محصول PCR در نمونه كنترل نشان دهنده عدم و يا بيان بسيار كم ژن مذكور در گروه كنترل مي باشد. نتيجه گيري: توانايي BCG و مايع كيست هيداتيد بارور در القا پلاريزاسيون ماكروفاژها مي تواند در مطالعات تجربي مرتبط با تمايز ماكروفاژي مورد استفاده قرار گيرد. تاكيدبركارآيي اين روش ساده وكم هزينه در مقايسه بابكارگيري ازكيت هاي پرهزينهء تمايز ماكروفاژي نياز به پژوهش هاي تكميلي دارد.

background: Classical macrophages (M1) and alternative macrophages (M2) are responsible for various functions in order to maintain homeostasis. BCG vaccine and hydatid cyst fluid can be examples of stimulants which can cause M1and M2 macrophage polarization. Evaluating the expression of markers such as IFNγ and TNFα for M1 phenotype and TGFβ and IL4 for M2 phenotype is one of the confirmatory ways of polarization. The purpose of this study was to verify the polarization of macrophages which were induced by BCG vaccine and hydatid cyst fluid by studying the gene expression of aforementioned markers. Methods: Diluted heparin fresh venous blood was layered by ficol 1077 and then peripheral blood mononuclears were separated by gradient concentration. Monocyte populations were separated by adhesion technique from floating cells in RPMI medium. Derived macrophages were treated by BCG vaccine and hydatid cyst fluid for 8 hours. RT-PCR was performed for confirming the polarization and the expression of amplified genes were compared with control groups. Results: Amplification of TNFα and IFNγ genes in M1 group and TGFβ and IL4 in M2 group confirmed the polarization procedure. Also, lack of PCR product in negative control samples indicates the absence or a very low expression of this gene in control group. Conclusion: The ability of these stimulants in macrophage polarization can be used in experimental studies. It is also possible to take advantage of this model to achieve useful goals in cell therapy and develop more efficient therapeutic methods in inflammatory diseases and cancer immunotherapy.