شناسايي باكتري اشريشيا كلي سويه O157:H7 با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي براي ژن‌هاي rfbE و stx2b

Identification of E. coli O157:H7 by Using Specific Primers for rfbE and stx2b Genes

زمينه: باكتري اشريشيا كلي سويه O157:H7 جزء پاتوژن‌هاي روده‌اي مي‌باشد كه آسيب‌هاي جدي را بر دستگاه گوارش پديد مي‌آورد. شناسايي اين باكتري كه قابليت توليد توكسين را داراست و عامل اصلي عفونت‌هاي بيمارستاني محسوب مي‌شود، عموماً از طريق كشت بر روي محيط سوربيتول مكانكي آگار انجام مي‌شود كه آزموني زمانبر است. هدف از انجام اين پژوهش فراهم ساختن روشي سريع و دقيق به منظور شناسايي اين باكتري با استفاده از روش مولكولي مبتني بر تكنيك PCR بود. مواد و روش‌ها: ژن‌هاي rfbE و stx2b براي شناسايي اختصاصي اشريشيا كلي سويه O157:H7 انتخاب شدند و پس از طراحي پرايمرهاي اختصاصي، تكثير ژن‌ها توسط PCR صورت پذيرفت. از محيط كشت اختصاصي سوربيتول مكانكي آگار براي بررسي قابليت رشد كلني‌هاي انتخاب شده طي فرآيند PCR استفاده گرديد. يافته‌ها: با ظهور باندهاي مربوط به ژن‌هاي rfbE و stx2b بر روي ژل آگارز تأييد گرديد كه پرايمرهاي طراحي شده توانسته‌اند به خوبي وجود ژن rfbE و توكسين شيگا را در نمونه متعلق به باكتري اشريشيا كلي سويه O157:H7 شناسايي نمايند. كلني‌هاي انتخاب شده طي PCR‌ قابليت رشد بر روي محيط سوربيتول مكانكي آگار را داشتند. نتيجه‌گيري: مشخص گرديد كه ما مي‌توانيم روشي سريع، دقيق و نسبتاً راحت را براي شناسايي پاتوژن اشريشيا كلي سويه O157:H7 با استفاده از تكنيك PCR و وجود پرايمرهاي اختصاصي نسبت به ساير روش‌هاي موجود فراهم كنيم.

Background: E. coli O157:H7 is one of the intestinal pathogens which can cause severe lesions in the gastrointestinal system. These bacteria can produce toxins and are the main cause of hospital infections. Their detection is usually done by culture on sorbitol-MacConkey agar which is a time-consuming test. The aim of this study was to develop a rapid, yet accurate method to identify this bacterium using a PCR based technique. Material and Methods: rfbE and stx2b genes were selected for identification of specific E. coli O157:H7 strain. Then amplification was performed by PCR following designing specific primers. Sorbitol-MacConkey agar was used to verification of growth ability of selected colonies during PCR. Results: By the appearance of the bonds belong to rfbE and stx2B genes on an agarose gel, the ability of designed primers for gene detection in samples of E .coli O157:H7 was verified. A sorbitol-MacConkey agar medium was used to evaluate the growing potency of colonies selected during PCR. Conclusion: In this study we demonstrated that we could develop a fast, accurate, and relatively comfortable method for detection of E. coli O157:H7 strain by using PCR technique and specific primers instead of using current methods.