مايع آمنيون حمايت كننده رشد پلاسماسل‌ها

Amniotic Fluid that Supports the Growth of Plasma Cells

زمينه: مالتيپل ميلوما نوعي سرطان پلاسماسل‌هاي خون مي‌باشد كه پيشرفت آن بستگي به تعامل بين سلول بدخيم پلاسماسل و ريز محيط مربوطه دارد كه توسط گيرنده‌ها تنظيم مي‌شود. هر چند چسبندگي اوليه سلول‌ها و مقاومت به آپوپتوز و افزايش ترشح سيتوكين‌ها و فاكتور‌هاي رشد باعث زنده ماندن، رشد و تكثير سلول ميلوما مي‌شود ولي امكان نگهداري سلول‌هاي ميلومايي در محيط آزمايشگاه به راحتي وجود ندارد و با چالش‌هاي خاصي روبروست و از آنجايي كه انجام تحقيقات بر روي ميلوما مستلزم بهينه‌سازي و حفظ شرايط كشت آنها در داخل آزمايشگاه مي‌باشد، به نظر مي‌رسد مايع آمنيوتيك مي‌تواند منجر به ارتقا شرايط كشت اين سلول‌ها در محيط داخل آزمايشگاه گردد. مواد و روش‌ها: سلول‌هاي ميلومايي 6 بيمار با استفاده از تكنيك MACS جدا شدند. سلول‌ها در محيط كشت شامل RPMI به همراه 100 درصد FBS (فعال و غيرفعال) و غلظت‌هاي 10، 20 و 50 درصد مايع آمنيوتيك (فعال و غيرفعال) به مدت دو هفته كشت داده شدند. بقاي سلولي با استفاده از روش رنگ‌آميزي تريپان بلو در طي اين دو هفته به صورت يك روز در ميان اندازه‌گيري شد و در ادامه بيان ژن‌هاي مربوط به تكثير (BCL-2)، لانه گزيني (CXCR4) و توقف چرخه سلولي (P27، P21) با استفاده از تكنيك PCR كيفي مورد مطالعه قرار گرفت. يافته‌ها: نتايج نشان داد كه محيط شامل 25 درصد مايع آمنيوتيك غيرفعال به همراه 10 درصد FBS غير فعال به ميزان قابل ملاحظه‌اي تكثير سلول ميلوما را افزايش مي‌دهد همچنين در روز صفر (روز جداسازي) همه ژن‌هاي نامبرده بيان شدند. از طرف ديگر، در همه گروه‌ها، در روز چهارم كشت، ژن‌هاي BCL-2 و CXCR4 بيان داشته، در حالي كه ژن‌هاي P21 و P27 هيچ بياني نداشتند كه مي‌تواند نشان دهنده تأثير مايع آمنيون بر روي رشد و تكثير سلول‌هاي ميلومايي باشد. نتيجه‌گيري: بر اساس نتايج به‌دست آمده، استفاده از محيط، شامل 25 درصد مايع آمنيوتيك غيرفعال به همراه محيط پايه كه شامل RPMI و 10 درصد FBS غيرفعال مي‌باشد براي كشت سلول‌هاي ميلوما توصيه مي‌شود.

Background: Multiple myeloma is a type of plasma cell carcinoma, whose development depends on the interaction between malignant plasma cells and the microenvironment that is regulated by the receptors. Although the initial adhesion of the cells, resistance to apoptosis, and increased secretion of cytokines and growth factors contribute to the survival, growth and proliferation of myeloma cells, maintaining lung cells in the laboratory is not easy and faces certain challenges. Since conducting research on myeloma requires optimizing and maintaining their culture conditions in vitro, it appears that amniotic fluid can promote the culture of these cells in vitro. Materials and Methods: Myeloma cells were isolated from six patients by MACS technique. Cells were cultured in media containing RPMI with 10% FBS (active and inactive) and 10%, 25%, 50% amniotic fluid (active and passive) for 2 weeks. Cell survival was measured every other day using trypan blue staining during these two weeks. Next, the expression of proliferation genes (BCL-2), implantation genes (CXCR4) and cell cycle stop genes (P21, P27) were studied using qualitative PCR technique. Results: The results showed that the medium containing 25% passive amniotic fluid and 10% inactive FBS significantly increased the proliferation of myeloma cells, and on day zero (on the day of isolation) all of these genes were expressed. Furthermore, on the fourth day of cultivation, in all groups, BCL-2 and CXCR4 genes were expressed, while P21 and P27 genes were not. This difference could indicate the effect of amniotic fluid on the growth and proliferation of the myeloma cells. Conclusion: According to the results, the use of a medium containing 25% inactive amniotic fluid plus a base medium that contains active RPMI and FBS 10% is recommended for the culture of myeloma cells.