مقايسه اثر ايمني زايي پروتئين هاي نوتركيب EIT و Stx2B متصل به نانو ذرات بر پايه كيتوزان در مدل حيواني به عنوان كانديداي نانوواكسن بر عليه E . coli O157 : H7

Comparison of immunization potential from recombinant proteins EIT and Stx2B nanoparticulated based on chitosan in animal model, as nanovaccin candidate against E. coli O157:H7

مقدمه: باكتري E . coli 0157 : H7 پاتوژن مشترك بين انسان و دام و ايجاد كننده سندرم اورمي هموليتيك (HUS) و اسهال حاد در انسان مي باشد كه به دليل قابليت لانه گزيني سريع در دستگاه گوارش انسان حائز اهميت است. يكي از راه كارهاي مقابله و پيشگيري در برابر اين بيماري ها بكارگيري نانو واكسن هاي حاصل از آنتي ژن هاي نوتركيب فاكتورهاي بيماري زاي اين باكتري مي باشد. در اين تحقيق پروتئين هاي نوتركيب EspA , Intimin , Tir ) EIT ) و Stx2B با نانو ذرات كيتوزان انكپسوله و در دو گروه EIT همراه Stx2B و بدون آن به موش هاي BALBI تلقيح شدند و ميزان ايمني زايي ارزيابي و مقايسه شد. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي پروتئين هاي نوتركيب EIT و Stx2B پس از بيان و خالص سازي با روش ستون نيكل و تأييد با وسترن بلاتينگ، با نانو ذرات كيتوزان به روش ژلاسيون پوني نانو پارتيكله شدند. پس از واكسيناسيون آنتي بادي هاي سرمي و مدفوعي ضد rEIT و rStx2B با استفاده از الايزا ارزيابي و مقايسه شد. چالش ريزش مدفوعي باكتري با نرم افزار Excel و ميزان محافظت موش ها بر عليه سم اين باكتري بر اساس تست دقيق فيشر مورد آزمايش قرار گرفت. نتايج: ميزان IgG سرمي وIgA سرمي و مدفوعي موش ها اندازه گيري و مقايسه شد. ايمني مطلوب تري در گروه هاي واكسينه شده خوراكي - تزريقي با مخلوط دو آنتي ژن ناتوپارتيكله به دست آمد. محافظت حيواني در برابر سم فقط در گروه هاي واكسينه rEIT همراه با rStx2B مشهود بود. سطح اختلاف معني دار بين اين گروه ها و كنترل مشهود بود ( 0/05 >P). نتيجه گيري: شواهد نشان مي دهد از پروتئين نوتركيب TEIT همراه با rStx2B متصل به نانو ذرات كيتوزان مي تواند مقابله مؤثرتري از طريق جلوگيري از اتصال باكتري و خنثي سازي سم حاصل از آن داشته باشد.

Introdution: E. coli O157:H7 with its ability of quick implantation inside gastrointestinal tract that causes hemolytic uremic and bloody diarrhea in humans is an important subject to investigate. One of the effective ways to prevent these infections is using nanovaccines prepared from immunogenic recombinant protein from bacterial virulence factors. In this research, the chitosan encapsulated by recombinant protein of EIT with and without Stx2B were introduced to BALB/c mice and immunogenicity was evaluated and compared. Methods: In this experimental study the recombinant protein of EIT and Stx2B were nanoparticulated with chitosan through ionic gelation method after expression and purification with Ni-NTA column and approval by Western blotting. After Vaccinations antibodies against rStx2B and rEIT in the mice’s serum and feces were detected by ELISA. Challenge test for neutralization and protection against Stx2 toxin was applied with immunized serum by Fisher's exact test. Results: Evaluation of IgA and IgG antibody levels in the mice’s serum and also the IgA level in their feces showed more appropriate immunity oral-injection groups with the both nanoparticulated antigens. The protection challenge study show that, the mice group which received rEIT+ rStx2B could neutralize the toxin activity significant difference (P<0.05) between test and control groups of mice was recorded. Conclusion: The data indicate these multiple vaccine candidates with both nanoparticulated recombinant proteins EIT and Stx2B with chitosan, provide more effective protection against of E. coli O157:H7.