ايجاد سازواره ژني براي دست‌كاري ژنتيكي سالمونلا انتريتيديس در محل اختصاصي ژن sipC

Generation of a gene cassette for genetically engineered Salmonella Enteritidis in the specific region of the sipC gene

مقدمه: بيماري سالمونلوز بر اثر مصرف مواد غذايي آلوده به سالمونلا در انسان و حيوانات ايجاد مي‌شود. سالمونلا، توان ايجاد عفونت خود را به واسطه داشتن ژن‌هاي بيماري‌زايي متعدد كسب كرده است. ژن sipC يكي از ژن‌هاي بيماري‌زايي سالمونلا است كه پروتئين SipC را كد مي‌كند. هدف از اين پژوهش ايجاد يك كاست ژني به منظور دست‌كاري ژنتيكي سالمونلا انتريتيديس در محل ژن sipC هست. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي، پس از استخراج DNA از سالمونلا، نواحي فرادست (up) و فرودست (down) ژن sipC به روش PCR، تكثيرو محصولات PCR به روش همسانه‌سازي T/A در وكتور pGEM درج شدند. به منظور ايجاد سازواره نهايي، هر يك از قطعات نواحي فرادست و فرودست ژن sipC به ترتيب در وكتور pET32 ساب كلون گرديدند و صحت كلونينگ با روش‌هاي PCR و هضم آنزيمي بررسي شد. نتايج: تكثير نواحي 320 جفت بازي فرادست و 206 جفت بازي فرودست ژن sipC با روش PCR با موفقيت انجام شد. همسانه‌سازي T/A اين قطعات، سبب تشكيل دو وكتور نوتركيب pGEM-up و pGEM-down شد. نتايج تاييد صحت ساب كلونينگ، مويد تشكيل كاست ژني نهايي pET32-up-down است. نتيجه‌گيري: كاست ژني ساخته شده در اين مطالعه به عنوان يك كاست چند منظوره قادر به دست‌كاري اختصاصي ژن sipC سالمونلا به روش نوتركيبي همسان است. اين سازواره ژني از پتانسيل لازم براي حذف ژن sipC و يا درج هر ژن مفيد و مؤثري به جاي ژن sipC، برخوردار است.

Introduction: Salmonellosis is an infection caused by eating contaminated food with Salmonella, and it can occur in humans and other animals. Salmonella has acquired the ability to create the infection due to the presence of several virulence genes. One of the virulence genes of salmonella is sipC gene that coding the SipC protein. The aim of this study was creating the gene cassette to genetically engineered Salmonella enteritidis in the specific region of the sipC gene. Methods: In this study, after DNA extraction from Salmonella, the upstream and downstream regions of the sipC gene was amplified based on PCR method. The PCR products were cloned with T/A cloning method and they were inserted into the pGEM vector. In order to generate the final gene cassette, each of the upstream and downstream regions of the sipC gene was subcloned into the pET32 vector, and cloning accuracy was assessed by PCR and enzyme digestion methods. Results: Amplification of the 320 bp upstream and 206 bp downstream of sipC gene was successful by PCR method. T/A cloning of these fragments were caused the formation of two pGEM-up and pGEM-down recombinant vectors. Results that were confirmed the sub-cloning accuracy indicate the formation of the final pET32-up-down gene cassette. Conclusion: The generated gene cassette in this study was considered as a multi-purpose cassette that is able to specific gene manipulation of Salmonella sipC gene by homologous recombination matched. This gene cassette has the necessary potential for sipC gene deletion or insertion of any useful gene instead of sipC gene.