اثر عصاره سير بر بيان ژن‌هاي iNOSو IFNγ در رده سلولي J774 آلوده به ليشمانيا ماژور

The Effect of Garlic Extract on Expression of IFN-γ and iNOS Genes in Macrophages Infected with Leishmania Major

زمينه و هدف: انگل‌هاي ليشمانيا، در صورت فعال شدن ماكروفاژها قابل فاگوسيت شدن مي‌باشند، اين سازوكار با توليد راديكال‌هاي فعال اكسيژن و نيتريك‌اكسايد قابل انجام است، كه از طريق ايمونومدولاتور‌ها صورت مي‌گيرد. دراين مطالعه، تأثير عصاره آبي سير بر سلول‌هاي J774 آلوده به انگل ليشمانيا ماژور و بيان ژن‌هاي iNOS و IFN γ مورد بررسي قرار گرفته است. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه آزمايشگاهي سلول‌هاي J774 با پروماستيگوت‌هاي انگل ليشمانيا ماژور (MRHO/IR/75/ER) مجاور شدند. پس از 72 ساعت، به سلول‌هاي آلوده شده، عصاره سير در 5 غلظت، 25/9، 5/18، 37، 74 و 148 ميلي‌گرم بر ميلي‌ليتر اضافه شد، سپس پروليفراسيون سلولي با آزمون MTT بررسي شد. پس از 72 ساعت از مجاورت سلول‌هاي J774 آلوده به انگل با IC50 سير، سوپ سلولي جمع‌آوري شد. RNA توتال اين سلول‌ها استخراج و توسط آزمايش Reverse transcription polymerase chain reaction بيان ژن‌هاي IFN γ و iNOS بررسي گرديد. از نمونه تيمار نشده با عصاره سير به عنوان كنترل استفاده شد. تمامي نتايج طي 3 مرحله با آزمون آماري t-student تجزيه و تحليل شدند. يافته‌ها: غلظت IC50 عصاره سير 37 ميلي‌گرم بر ميلي‌ليتر بود. بيان ژن‌هاي IFN γ و iNOS با روش RT-PCR نشان داد عصاره سير با IC50 موجب افزايش بيان ژن‌هاي iNOS و IFN γ در سلول‌هاي J774 آلوده به ليشمانيا ماژور مي‌شود. نتيجه‌گيري: با توجه به اهميت سايتوكاين‌هاي ايمني سلولي در توسعه و ايجاد پاسخ‌هاي ايمني سلولي و با توجه به يافته‌هاي فوق، اين فرضيه كه احتمالاً اثر سير بر ايمني سلولي ناشي از افزايش سيتوكاين INF γ و فعال شدن ژن iNOS است، تأييد مي‌شود.

Background and Objectives: The protozoa of leishmania lead to cutaneus and visceral leishmaniasis. Activation macrophages phagocyte parasites and this mechanism can be done with production of active radicals oxygen and nitric oxide, That is done through immunomodulator, as a basic process for production of the new drug. In this study, the effect of garlic extract as an immunomodulator on J774 cells infected with Leishmania major and iNOS gene expression and IFNγ has been investigated. Materials and Methods: Leishmania major promastigotes (MRHO/IR/75/ER) were added to the in-vitro cultured macrophages (J774 cells) and these cells were incubated for 72 hours.Various concentrations of garlic extract( 9.25-18.5-37-74-148 mg/ml) were added to the infected cells . MTT assay was applied for cellular prolifration. After 72 hours of incubation, supernatants were collected and total RNA was extracted from the infected cells. The expression of IFNγ and INOS genes were studied by RT-PCR method. Untreated sample with garlic was used as control. All the experiments were repeated at least three times, and representative results were analyzed. Statistical significance (P < 0.05) was analyzed by Student’s t-test using SPSS version16. Results: The result of this study, using MTT method showed that, the IC50 concentration of garlic extract was 37 mg/ml. Also the expression of IFNγ and iNOS genes by RT-PCR indicated that garlic extract lead to rise of expression of these genes in the J774 cells infected with L.major. Conclusion: Based on the findings and importance of the cellular immunity cytokines in developing and importance of the responses, the hypothesis that the effect of AGE in cellular immunity is due to rising the IFNγ cytokines and expression of iNOS genes is confirmed.