بهينه سازي روش ريز استخراج مايع مايع پخشي براي تعيين مقادير جزيي ملاتونين بزاقي بوسيله كروماتوگرافي مايع با عملكرد عالي

Optimization of dispersive liquid-liquid for determination of trace salivary melatonin using high performance liquid chromatography

زمينه و هدف : تعيين مقدار ملاتونين به علت غلظت پايين آن و بعلاوه وجود ساير تركيبات مشابه در مايعات بدن ، يك چالش جدي براي آناليست ها بوده است. آماده سازي نمونه قبل از انجام آناليز دستگاهي براي تعيين مقدار ملاتونين در نمونه هاي مختلف يك امر اجتناب ناپذير مي باشد. اين مطالعه به دنبال روشي جديد با صحت و دقت بالا بود كه بتواند با استفاده از تجهيزات موجود در آزمايشگاه هاي معمولي براي تعيين سطوح جزيي ملاتونين در بزاق بعنوان شاخص ريتم سيركادين در انسان مورد استفاده قرار گيرد. به همين منظور به بهينه سازي روش ميكرو استخراج مايع-مايع پخشي(Disspersive Liquid-Liquid Microextraction) كه تاكنون براي ملاتونين بزاقي استفاده نشده بود پرداخته شد. روش بررسي : مطالعه حاضر يك مطالعه كاربردي مي باشد. مرحله بهينه سازي شامل بررسي هشت عامل موثر بر روش DLLME بود. از اين ميان هفت مورد آنها در چهار سطح و صرفا pH در پنج سطح مورد بررسي قرار گرفت و مقادير بهينه تعيين شدند. همچنين اعتبار سنجي روش بهينه سازي شده بصورت روز به روز به مدت شش روز متوالي و شش بار در يك روز با محاسبه ضريب تغييرات براي سه غلظت 50، 100و 250 پيكوگرم بر ميلي ليتر انجام گرديد. يافته ها: مقادير بهينه براي هركدام از عوامل مورد بررسي بدست آمد. صحت و دقت روش بهينه سازي شده با محاسبه مقادير ضريب تغييرات سه غلظت نام برده بررسي شد.تكرارپذيري روز به روز به ترتيب 6/29، 2/39 و 1/82 و براي تكرارپذيري در يك روز به ترتيب 4/49، 2/68 و 1/83 مي باشد. نتيجه گيري: با توجه به مقادير ضريب تغييرات بدست آمده، روش بهينه سازي شده از صحت و دقت مناسبي برخوردار بوده است. با وجود اينكه بهينه سازي عوامل موثر در استخراج بايد به تناسب آناليت مدنظر صورت گيرد، اما اين متغيير ها را مي توان براي تركيبات شيميايي مشابه با اندكي تغييرات استفاده كرد.

Background and aims: Due to low concentration of melatonin and also the existence of other compounds in body fluids, measuring the amount of melatonin is a serious challenge for the analysts. Before measurement of melatonin amounts using chromatographic method, sample preparation is unavoidable. The aim of current study is develop a new sample preparation method that not only have high accuracy and validity, but also can using by conventional equipment available in the laboratory to determine trace levels of salivary melatonin. For this purpose, the dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) method, that has not been used so far to preparation of salivary melatonin samples, were optimized. Methods: Optimization procedure involved evaluation of eight factors affecting DLLME method. From these factors, seven were examined in four levels, and just pH was done in five levels. Accuracy and precision of the optimized method was evaluated at three concentrations of 50, 100, 250 pg.ml-1 by achieving CV% for day-to-day and within-day reproducibility. Results: Optimum values were determined. Accuracy and precision of the optimized method was investigated at three concentrations of 50, 100, and 250pg/ml by achieving CV% of 6.29, 2.39, and 1.82 for the "day-to-day" and 4.49, 2.68, and 1.83 for "within-day" reproducibility. Conclusion: Due to the results of this study for Coefficient of variations, the optimized method was provided with proper accuracy and precision. Although optimized extraction factors must be fit analyte, but these factors can be used for similar chemical compounds with a slight modification.