بررسي اثر نيكوتين در دوران بارداري و شيردهي بر تغيير بيان لامينين آلفا-5 غشاء پايه در لوله‌هاي پيچيده دور و جمع‌كننده ادرار در موش

Effects of Maternal Nicotine Exposure on Laminin Αlpha 5 Expression Change of the Basal Membrane in the Distal Convoluted and Collecting Tubules in Mice

زمينه و هدف: در حال حاضر مشخص شده است مادراني كه در دوران بارداري سيگار مصرف ميكنند، بيان فيبرونكتين و لامينين آلفا- 5 در بعضي از ارگانهاي جنين آنها تغيير مييابد، به عنوان مثال بيان اين پروتئين ها در پارانشيم ريه هاي نوزادان كاهش مي يابد. در مطالعه حاضر، اثر نيكوتين در دوران بارداري و شيردهي بر تغيير بيان لامينين آلفا- 5 غشاء پايه در لوله هاي پيچيده دور و جمع كننده ادرار در موش مورد بررسي قرار گرفت. مواد و روشها: اين مطالعه تجربي بر روي 28 سر موش حامله كه به شكل تصادفي به چهار گروه هفت تايي تقسيم شده بودند،صورت گرفت. در گروه آزمايشي روز اول از روز 7 حاملگي تا تولد نوزادان و در گروه آزمايشي روز چهاردهم از روز هفتم بارداري تا 14 روز بعد از تولد نوزادان، نيكوتين به ميزان 2 ميليگرم بر كيلوگرم و به صورت داخل صفاقي به مادران تزريق شد. در گروههاي سوم و چهارم، به عنوان گروههاي كنترل، به ترتيب مشابه با گروههاي آزمايشي اول و دوم تحت تزريق ميزان و مدت زمان معادلي از سالين قرار گرفتند. بعد از آخرين تزريق كليه همه نوزادان (متوسط 50 نوزاد در هر گروه) بعد از بيهوشي بيان لامينين مورد بررسي قرار گرفت. داده ها با Real time PCR برداشت شده و با استفاده از روش هاي ايمنوهيستوشيمي و مستقل تجزيه و تحليل شدند. t و آزمون Mann-Whitney استفاده از آزمون ناپارامتري لامينين آلفا- 5 در گروه آزمايش روز اول به ميزان 2 برابر در مقايسه با گروه mRNA يافته ها: نتايج مطالعه حاضر نشان داد بيان 0) نسبت به گروه كنترل روز چهاردهم /62±0/ معادل يعني كنترل روز اول افزايش يافت، اما در گروه آزمايش روز چهاردهم ( 19 در روش ايمنوهيستوشيمي در لوله هاي جمع كننده گروههاي آزمايش روز اول و .(p=0/ 0/95±0/14 ) كاهش داشت ( 043 ) در حاليكه ،(p=0/ چهاردهم نسبت به گروههاي كنترل معادل بترتيب افزايش و كاهش معني داري از واكنش مشاهده شد ( 039 در لوله هاي پيچيده دور تنها اختلاف معني داري از نظر شدت واكنش بين گروه آزمايش روز اول و گروه كنترل روز اول مشاهده 41 0/p=0 شد . نتيجه گيري: مصرف نيكوتين توسط مادر با اثر بر روي بيان لامينين به عنوان يكي از تركيبات مهم يكي از تركيبات مهم غشاء پايه كليوي، ممكن است يكي از عوامل مؤثر در افزايش بيماريهاي كليوي در افراد سيگاري باشد.

It is obviously approved that Fibronectin and Laminin α-5 (LAMA5) expression will change, in some organs of fetuses that their mothers were smoking during pregnancy period. For example, the expression of mentioned proteins in newborns decreases in parenchyma of their lungs. In present study, we evaluated the effects of maternal nicotine exposure on LAMA5 expression change of the basal membrane in the distal convoluted and collecting tubules in Mice. Materials and Methods: The present experimental study was performed on 28 pregnant mice which were randomly divided into four groups (n=7). Pregnant mice in experimental day 1 group received 2 mg/kg nicotine from gestation day 7 (GD7) to last day of pregnancy and experimental day 14 group received the same amount of nicotine from GD7 to post natal day 14(GD14). Control groups 3 and 4 were injected with the same volume of normal saline parallel to experimental groups (Con). After the last injection, all the newborns (average 50 newborns in each group), were anesthetized in order to remove their kidneys and become prepared for Immunohistochemical method and real-time polymerase chain reaction to detect the expression of Laminin. Data were analyzed using non-parametric Man-Whitney U test and t-test. Results: Our results show that LAMA5 mRNA expression in the kidneys of newborns treated with nicotine, Exp D1 increased about 2-fold in comparison with Control day 1 group , but decreased in Exp D14 (0.62±0.19) comparing to Control day 14 (0.95±0.14) (p=0.043). Lama5 Immunoreactivity in collecting tubules respectively increased and decreased in the Exp day1 and day 14 groups in comparison with Control groups (p=0.039). In the distal convoluted tubules, only a significant difference was found between the experimental day 1 group and Control day 1 group (p=0.041).Conclusion: Maternal nicotine exposure may induce abnormal Laminin expression as a main component of renal base membrane, which may cause defects in kidney function and structure during life time.