جد اسازي و شناسايي هويت مزانشيمي و ستيغ عصبي سلو لهاي بنيادي مشتق از پالپ دندان

Isolation and identification of mesenchymal and neural crest characteristics of dental pulp derived stem cells

سابقه و هدف: امروزه سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي به عنوان منبع بي‌نظير سلول‌هاي بنيادي بزرگسالان در نظر گرفته مي‌شوند كه با كم‌ترين مسائل اخلاقي در دسترس مي‌باشد. اين سلول‌ها جهت بررسي بيولوژي سلول‌هاي بنيادي، روند تمايز آن‌ها به ديگر سلول‌ها، مهندسي بافت، پزشكي ترميمي و درمان‌هاي نوين سرطان مورد استفاده مي‌باشد. هدف از تحقيق حاضر جدا‌سازي سلول‌هاي بنيادي پالپ دندان و تاييد ويژگي‌هاي مزانشيمي آن به روش‌هاي معمول مي‌باشد. هم‌چنين بيان پروفايل ژني مربوط به سلول‌هاي ستيغ عصبي در آن‌ها بررسي مي‌گردد. مواد و روش ‌ ها: پس از تهيه دندان‌ها، اتاقك پالپ نمايان و بافت پالپ به‌وسيله آنزيم كلاژناز تيپ چهار، هضم گرديد. سپس، سلول‌هاي جدا‌شده از پالپ دندان در محيط αMEM ، حاوي 15% سرم جنين گاوي مخلوط شد و در دماي C ˚ 37، رطوبت 95% و CO2 5% كشت داده شدند. قدرت تمايز سلول‌هاي بنيادي پالپ در محيط‌هاي تمايزي استخواني و چربي مورد ارزيابي قرار گرفت. درصد بيان نشانگرهاي CD90 و CD45 به روش فلوسايتومتري بررسي شد. هم‌چنين، بيان ژن‌هاي p75ngfr ، slug و sox10 به روش RT-PCR مورد بررسي قرار گرفت. يافته ‌ ها: سلول‌هاي بنيادي مشتق از پالپ دندان قابليت اتصال خوبي داشتند و پتانسيل تكثيري بالاي از خود نشان دادند. رنگ‌آميزي Alizarin Red و Oil red نشان داد كه اين سلول‌ها در شرايط مساعد، مي‌توانند به ترتيب تمايز استئوژنيك و آديپوژنيك داشته باشند. سلول‌هاي جداسازي شده از پالپ دندان با درصد بالا نشانگر CD90 را بيان مي‌كردند؛ در حالي كه درصد بيان CD45 ،كه نشانگر سلول‌هاي هماتوپويتيك مي‌باشد، در اين سلول‌ها ناچيز بود. هم‌چنين، نتايج RT-PCR حاكي از بيان ژن‌هايي هم‌چون p75ngfr ، slug و sox10 در سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي پالپ دندان بود. نتيجه ‌ گيري: سلول‌هاي جداسازي شده از پالپ دندان، ويژگي‌هاي سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي را دارا هستند و حداقل جمعيتي از سلول‌هاي حاصل؛ منشا و ماهيت ستيغ عصبي دارند.

Introduction: Mesenchymal stem cells (MSC) are considered as a unique source of adult stem cells which are usually accessible with minimum ethical concerns. MSCs can be used in stem cell biology, different to other cells, tissue engineering, regenerative medicine and future of cancer treatment researches. The aim of the present study was to isolate dental pulp derived stem cells (DPSCs), characterizing them with common techniques and determining neural crest genes expression profile. Materials and Methods: After collecting the teeth, the pulp chamber exposed and the pulp tissue digested with collagenase IV. Dental pulp derived cells were resuspended and incubated in alpha modified minimum essential medium eagle (αMEM) supplemented with 15% fetal bovine serum at 37°C temperature, 95% humidity and 5% CO2. The osteogenic and adipogenic differentiation potentials for dental pulp derived cells were assessed in appropriate conditions. Flow-cytometry analyses were utilized to evaluate the percentage of CD90 and CD45 positive markers within isolated cells. The expression of p75ngfr, slug and sox10 genes was measured via RT-PCR. Results: Dental pulp derived cells were appropriately attached to the culture vessels and showed high proliferation rate on culture medium. Cells could also differentiate to osteogenic and adipose cells; displayed by Alizarin red and Oil red staining. Higher percentage of pulp derived cells were CD90 positive, while the percentage of CD45 expression, as a marker of hematopoietic cells, was negligible. Furthermore, the RT-PCR also revealed the expression of p75ngfr, slug and sox10 in the MSCs isolated from the dental pulps. Conclusion: Dental pulp derived cell have the mesenchymal stem cells characteristics and at least a portion of them have neural crest origin and identity