عنوان مقاله :
طراحي، ساخت، همسانه‌سازي و بيان ژن بتا ديفنسين و تاثير آن در ترميم زخم
عنوان به زبان ديگر :
Design, construction, cloning and expression of beta Defensin and its effect on wound healing
پديد آورندگان :
كريمي، نفيسه دانشگاه شهركرد - دانشكده علوم پايه - گروه ژنتيك شهركرد، شهركرد , صفار، بهناز دانشگاه شهركرد - دانشكده علوم پايه - گروه ژنتيك شهركرد، شهركرد , مبيني دهكردي، محسن دانشگاه شهركرد - پژوهشكده زيست فناوري، شهركرد , قائدي، كامران دانشگاه اصفهان - دانشكده علوم پايه - گروه بيولوژي، اصفهان
كليدواژه :
ديفنسين , التيام زخم , كدون , همانند سازي مولكولي , بيان ژن
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: در ميان پپتيدهاي ضد ميكروب، ديفنسينها يكي از بزرگترين خانوادهي پپتيدهاي ضد ميكروب ميباشند و به واسطهي فعاليت آنها بر ضد باكتري‌ها، قارچها و ويروسها، به عنوان آنتيبيوتيكهاي نسل جديد منفعت بسيار دارند. هدف از اين مطالعه طراحي، سنتز، همسانه‌سازي و بيان پروتئين بتا‌ديفنسين نوتروفيل‌هاي گاو (BNBD2) به منظور بررسي خاصيت ترميم زخم بوده است.
مواد و روش‌ها: در اين مطالعه ژن (BNBD2) با توجه به كدونهاي ترجيحي باكتري E.coli بهينه‌سازي و سنتز شد. از ناقل (+)pET-32a به منظور زير همسانه‌سازي ژن BNBD2 استفاده گرديد. بيان پروتئين BNBD2 با مادهي القا‌كننده (IPTG) با استفاده از سيستم الكتروفورز عمودي (SDS-PAGE) بررسي گرديد. خاصيت ترميم زخم توسط ايجاد زخم بر روي يك گروه از موشها و تيمار آنها با پروتئين بتا‌ديفنسين، در مقايسه با گروه كنترل مورد مطالعه قرار گرفت.
يافته‌ها: نتايج نشان داد كه ژن BNBD2 به طور موفقيت‌آميزي در ناقل (+)pET32a همسانه‌سازي شده است. پروتئين نوتركيب توسط IPTG القا گرديد. كاهش معني‌دار سطح زخم در گروه تيمار در مقايسه با گروه كنترل وجود داشت.
نتيجه‌گيري: پروتئين نوتركيب BNBD2 با موفقييت در سيستم پروكاريوتي بيان شد. اين پروتئين مي‌تواند در آينده در ترميم زخم مورد استفاده قرار گيرد.
چكيده لاتين :
Introduction: Defensins are members of the largest family of antimicrobial peptides and due to their activity against bacteria, fungi, and viruses are very profitable as new antibiotics. The aim of this study was to design, synthesis, clone and expression of BNBD2 (Bovine Neutrophil Beta-Defensin2) gene to investigate the wound healing process.
Materials and Methods: In this study, according to the preferred codon in E. coli, the BNBD2 gene was optimized and synthesized. The BNBD2 gene was sub cloned in vector pET-32a (+). The BNBD2 protein expression was assessed; using Isopropyl-ß-D-thio-galactoside (IPTG) as an inducer and evaluating by SDS-PAGE. The potency of BNBD2 protein for healing was studied by creating a wound on a group of mice and treating them with BNBD2 protein in comparison with the control group.
Results: The results showed that BNBD2 gene was successfully cloned into pET32a (+) vector. The expression of protein was induced by IPTG. There was a significant reduction in wound area in the treatment group in compare to the control group.
Conclusiosn: Recombinant protein (BNBD2) was expressed successfully in prokaryotic system. This protein might be potentially beneficial for wound healing procedures in the future.
