عنوان مقاله :
كلونينگ، بيان و تخليص فيتاز تغييريافته اشرشياكلي
عنوان به زبان ديگر :
Cloning, expression and purification of Escherichia coli modified phytase
پديد آورندگان :
حلاجي، مليحه دانشگاه علوم پزشكي اراك - گروه زيست فناوري و پزشكي مولكولي، اراك , پرهام فر، مريم دانشگاه علوم پزشكي اراك - گروه زيست فناوري و پزشكي مولكولي، اراك , رئوفي، احسان دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي درماني ايران - دانشكده پيراپزشكي -گروه بيوتكنولوژي، تهران , ابطحي، حميد دانشگاه علوم پزشكي اراك - گروه ميكروب شناسي و ايمني شناسي - مركز تحقيقات پزشكي و مولكولي،اراك
كليدواژه :
همانند سازي مولكولي , اسيد فيتيك , فيتاز
چكيده فارسي :
هدف: فيتازها گروهي از فسفاتازها هستند كه قادر به هيدروليز فيتيك اسيد مي‌باشند. فيتازها با تجزيه‌ي فيتات قادر به كاهش يا حذف اثرات مخرب فيتات هستند. فيتاز اسيدي و مقاوم دمايي همراه با توليد بالا و خالص و البته يك سيستم نسبتاً ارزان داراي كاربرد در مقياس وسيع مي‌باشد. لذا در اين مطالعه با تغييراتي در توالي آنزيم، توليد فيتاز نوتركيب با طول كم‌تر و ميزان بيان بيش‌تر مورد بررسي قرار گرفت.
مواد و روش‌ها: توالي ژن فيتاز از پايگاه NCBI گرفته شد. پس از مطالعات بيوانفورماتيكي و اعمال تغييرات مورد نظر به منظور افزايش بيان پروتئين، تكثير ژن با استفاده از PCR انجام شد. از سويه E.coli BL21 (DE3) براي بيان پروتئين استفاده شد. تخليص پروتئين با كيت Ni-NTA انجام شد و نهايتاً فعاليت آنزيم مورد ارزيابي قرار گرفت.
يافته‌ها: فيتاز با موفقيت بيان و تخليص گرديد. سنجش فعاليت آنزيم نشان‌دهنده‌ي فعاليت قابل توجهي بود.
نتيجه‌گيري: فيتاز نوتركيب توليد شده علي‌رغم حذف بخش‌هايي از آنزيم فعاليت بالايي داشت.
چكيده لاتين :
Introduction: Phytases are the class of phosphatases, which are capable of hydrolyzing phytic acid. Phytases with the phytate degradation are able to reduce or eliminate the harmful effects of phytate. Acidic and thermal stable phytase with high yield and purity by a relatively inexpensive system had extensive application. So, in this study, by modification in enzyme sequence, recombinant phytase production with the shorter length and high expression level was assessed.
Materials and Methods: The phytase gene sequence was obtained from the NCBI database. After bioinformatics studies and doing the noted modification for increasing protein expression, gene proliferation was done by using PCR. E. coli BL21 (DE3) was used to express the protein. Protein purification was performed by Ni-NTA kit and finally, enzyme activity was assessed.
Results: Phytase was successfully expressed and purified. Enzyme activity assay showed a significant activity.
Conclusion: Produced recombinant phytase had high activity in spite of eliminating parts of the enzyme.
