شناسايي ساب تايپ‌هاي بلاستوسيستيس نمونه‌هاي انساني با استفاده از ژن 18s rRNA در شمال غرب ايران

Identification of Blastocystis sp. subtypes from human using 18s rRNA in Northwest of Iran

زمينه و هدف: بلاستوسيستيس تك ياخته‌‌اي بي‌هوازي است كه در دستگاه گوارش انسان زندگي كرده و مي‌تواند به عنوان يك انگل زئونتيك در ميزبان‌هاي مختلفي نيز وجود داشته باشد. اين مطالعه در جهت شناسايي ساب تايپ‌ها و بررسي تنوع ژنتيك بلاستوسيستيس از نمونه‌هاي انساني شهرستان­هاي اروميه، تبريز و مراغه در شمال غرب ايران انجام گرفته است. روش بررسي: در اين مطالعه كه به روش توصيفي ـ مقطعي است، 300 نمونه­ مدفوع انساني كه از بهمن ماه 1395 تا مهرماه 1396 به صورت تصادفي و جهت غربالگري به مراكز بهداشتي و درماني مراجعه كرده بودند، انتخاب و پس از مطالعه مستقيم ميكروسكوپي مدفوع، 16 مورد ايزوله به دست آمده كه با روش DNA barcoding بررسي شدند. براساس روش‌هاي بيوانفورماتيكي سكانس محصولات به دست آمده مورد تحليل و مقايسه قرار گرفتند. يافته­ ها: از 300 نمونه مورد بررسي اين مطالعه، تعداد 22 مورد به صورت مطالعه ميكروسكوپي آلوده به بلاستوسيستس تشخيص داده شدند. 16 ايزوله متفاوت از موارد مثبت با روش مولكولي(PCR) جدا و سكانس محصولات به دست آمده مورد بررسي قرار گرفتند. 3 نوع ساب تايپ شامل؛ ST1، ST2 و ST3 در سكانس حاصل از اين نمونه‌ها به دست آمد. يكي از نمونه‌هاي مورد بررسي پس از دوبار سكانس متفاوت، هر دو زيرگونه ST1 و ST3 را داشت، ولي با سكانس مجدد زيرگونه غالب فرد، ST3 گزارش شد. نتيجه‌گيري: ساب تايپ‌هاي مختلفي از اين انگل در اين منطقه وجود دارد. با توجه به ماهيت ساب تايپ­ ها، چرخه زئونوتيك اين انگل در منطقه وجود داشته و با شناسايي و تعيين زيرگونه‌هاي بلاستوسيستيس در ميزبان­هاي مختلف به عنوان ارگانيسمي‌‌زئونوتيك، مي­توان به نحوه انتقال انگل و مهاجرت‌هاي ژنتيكي آن دست يافت. به نظر مي‌رسد مي­توان با استفاده از الگوي ساب تايپ‌هاي به دست آمده انگل، در مطالعات‌ آينده، ارتباط آن با علايم باليني مطرح و مورد بررسي قرار گيرد.

Background & aim: Blastocystis sp. is an anaerobic parasite which lives in the digestive system and can be a zoonotic parasite in different hosts. This study was carried out to identify subtypes and to investigate the genetic variation of Blastocystis sp. from human samples in Urmia, Tabriz & Maragheh cities Northwest of Iran. Methods: In the present descriptive-cross sectional study, 300 human stools from January to October 2017 were randomly selected from treatment centers in North West of Iran. Based on microscopic observation, positive samples examined by DNA barcoding methods for detection of Blastocystis sp. subtypes and their sequences were analyzed. Results: of the 300 samples, 22 specimens diagnosed as Blastocystis sp. with the microscopic method. Sixteen apart isolates from the positive cases obtained by the molecular method (PCR) and the sequences of the products were examined. Three types of subtypes including ST1, ST2 and ST3 obtained from these samples. One of the samples after two different sequencings, was reported as both of the ST1 and ST3 subspecies, but re-sequencing of the dominant show ST3. Conclusion: There are various subtypes of this parasite in this area. Due to the nature of the subtypes, the zoonotic cycle of this parasite exists in this region. By identifying and determining the Blastocysts subspecies in different hosts as a zoonotic organism, it is possible to detect genetic migration and parasite transmission. It seems that the parasite subtype pattern can be considered in future studies in relation to clinical manifestations.