شناسايي و تعيين پراكنش ويروس لكه حلقوي گوجه فرنگي (ToRSV) در باغ هاي درختان ميوه هسته دار استان هاي گلستان و فارس

An Identification and Evaluation of the Distribution of Tomato Ringspot Virus (ToRSV) of Stone Fruits, in Golestan and Fars Provinces, Iran

ويروس لكه حلقوي گوجه فرنگي Tomato ringspot virus (ToRSV) متعلق به جنس Nepovirus و خانواده Secoviridae مي باشد. زوال ناشي از اين عامل ويروسي يكي از عوامل تخريب درختان ميوه در جهان محسوب مي شود. در اين تحقيق جهت بررسي درصد آلودگيToRSV در باغات درختان ميوه هسته دار هلو، آلو، گوجه و زردآلو در استان هاي فارس و گلستان در طي سال هاي 1387 و 1388 ، تعداد 414 نمونه به صورت كاملا تصادفي و بدون در نظر گرفتن علايم جمع آوري شد و به روش DAS-ELISA مورد بررسي قرار گرفت. بر اساس نتايج آزمون DAS-ELISA آلودگي انواع درختان ميوه هسته دار مورد بررسي به ToRSV آشكار گرديد. نتايج نشان داد در سال هاي 1387 و 1388 درختان ميوه هسته دار در باغات استان فارس به ترتيب به ميزان 8/5 و 10/2% و باغات استان گلستان به ميزان 30 و 23/1% به ويروس لكه حلقوي گوجه فرنگي آلوده مي باشند. تعداد 100 نمونه از نمونه هاي هلو، آلو، گوجه و زردآلو كه واكنش ضعيفي در روش الايزا نشان داده بودند با آزمونDot immunobinding assay-DIBA مورد بررسي مجدد قرار گرفته و در 85 نمونه آلودگي مورد تاييد قرار گرفت. خصوصيات بيولوژيكي جدايه هاي رديابي شده با مايه زني مكانيكي گياهان محك و ويژگي هاي مورفولوژيك آن ها با مشاهده پيكره هاي ايزومتريك با روش Immunosorbent electron microscopy (ISEM) مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج نشان داد جدايه هاي موجود از لحاظ بيولوژيكي با ساير جدايه ها متفاوت نبوده و علايمي مانند لكه حلقوي نكروتيك، غربالي و موزاييك برگ، در درختان آلوده ايجاد مي كنند. تعداد 30 نمونه هلو، آلو، گوجه و زردآلو الايزا مثبت و آلوده توسط آزمون RT-PCR و جفت آغازگرهاي اختصاصي براي حضور ToRSV مورد بررسي قرار گرفتند. در تعداد 20 نمونه از انواع نمونه هاي مورد بررسي باند bp 499 مورد انتظار حاصل از تكثير منطقه ژنتيكي مربوط به بيان پروتئين پوششي ويروس تكثير گرديد. نتايج اين بررسي بيانگر آلودگي گونه هاي مختلف درختان ميوه هسته دار در برخي مناطق شمال و جنوب ايران به ToRSV مي باشد

Tomato ringspot virus (ToRSV) is a member of the genus Nepovirus, family Secoviridae, causing substantial economically declining in perennial crops, including stone fruits, worldwide. During the years 2008 and 2009 a total number of 414 symptomatic and asymptomatic leaf samples were randomly collected from different stone fruit trees including peach, apricot, plum and sour cherry from Fars and Golestan provinces. Applying DAS-ELISA method samples were tested for the presence of ToRSV, through specific polyclonal antibody. Serological tests revealed that, during the years 2008 and 2009, different stone fruits were infected with ToRSV, with the infection rates of 8.5% and 10.2% in gardens of Fars and in Golestan with respective infection rates of 30% and 23.1%. One hundred of different stone fruit leaf samples that had weakly reacted with ToRSV antibody in DAS-ELISA test, were tested again through Dot- immunobinding assay (DIBA), ToRSV infection being confirmed in 85 samples. For an evaluation the biological properties of the detected isolates, they were subjected to mechanical inoculation on herbaceous plants and the morphology of isometric viral particles observed through immunosorbent electron microscopy for apricot and peach samples. According to the host range study the Iranian isolates did not differe in biological properties from other isolates. Such Symptoms as necrotic ring spots and leaf mosaics were frequently related to the viral infection. Applying with RT-PCR, a DNA fragment of 499 bp, belonging to the coat protein coding sequence of the ToRSV genome, was amplified for 20 out of 30 peach, apricot, plum and sour cherry samples the samples were serologically tested as positive to ToRSV infection. Results proved that different stone fruits in some gardens in South and Northern parts of Iran are infected with ToRSV.