تأثير آپوپتوتيك عصاره گياه سنبله‌اي كركدار(Stachys pilifera Benth) روي سلول‌هاي سرطان كلوركتال رده HT-29

Apoptotic Effect of the Stachys pilifera Bent Plant Extracts on Colorectal Cancer Cell Line (HT- 29)

زمينه و هدف: در طب سنتي از گياه سنبله‌اي كركدار براي درمان انواع بيماري‌ها استفاده مي‌شود. علي‌رغم برخي گزارش‌ها در مورد اثرات ضد توموري برخي از گونه‌هاي اين جنس، فعاليت ضد سرطان سنبله‌اي كركدار هنوز گزارش نشده است. هدف از اين مطالعه بررسي اثر آپوپتوزي عصاره سنبله‌اي كركدار(Stachys pilifera Benth) و فركشن آلكالوئيدي و ترپنوئيدي آن در سلول‌هاي سرطاني كولوركتال HT-29 مي‌باشد. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي سلول‌هاي HT-29 كشت شد و سپس سلول‌ها با غلظت‌هاي مختلف عصاره متانولي سنبله‌اي كركدار، فركشن‌هاي آلكالوئيدي و ترپنوئيدي و سيس پلاتين به مدت 24 ساعت انكوبه شدند. بقاي سلول­هاي سرطاني با استفاده از آزمون(MTT) اندازه‌گيري شد. اثرات عصاره و تست‌هاي انجام شده بر روي مكانيزم‌هاي مرگ و مير سلولي مانند قطعه قطعه شدنDNA و آپوپتوز به وسيله دستگاه فلوسيتومتري انجام شد. سيس پلاتين به عنوان كنترل مثبت در اين مطالعه مورد استفاده قرار گرفت. داده‌هاي جمع‌آوري شده با استفاده از آزمون‌هاي آماري آناليز واريانس يك طرفه و تست تعقيبي توكي تجزيه و تحليل شدند. يافته ­ها: نتايج IC50 عصاره متانولي، فركشن‌هاي آلكالوئيدي، ترپنوئيدي و سيس پلاتين بر روي سلول HT-29 بعد از 24 ساعت به ترتيب برابر 612.8، 46.4، 46.8 و 4.06 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر بود. نتايج نشان داد كه مهار تكثير سلولي به صورت وابسته به دوز مي‌باشد. عصاره متانولي سنبله‌اي كركدار و سيس پلاتين باعث قطعه قطعه شدن DNA شدند. نتايج تست آپوپتوز نشان داد كه بيشترين درصد افزايش آپوپتوز در تيمار با سيس پلاتين( 8/30 درصد) و عصاره متانولي(2/23درصد) نسبت به گروه كنترل(تيمار نشده) بود(05/0p<). نتيجه‌گيري: عصاره هيدروالكلي سنبله­اي كركدار و فراكشن الكالوئيدي به صورت وابسته به دوز تكثير سلول‌هاي سرطاني كلوركتال HT-29 را متوقف و سلول‌‌‌ها را وارد فاز آپوپتوتيك مي‌كند. بنابراين گياه كانديداي مناسبي براي جلوگيري از تكثير سلوا‌هاي سرطاني كلوركتال مي‌تواند باشد.

Background & aim: Stachys pilifera Benth (Lamiaceae) is used in traditional medicine to treat a variety of diseases. Despite some reports on the antitumor effects of some species of this genus, anticancer activity of Stachys pilifera has not been yet reported. In the present study, the researchers examined the cytotoxic effect and cell death mechanisms of methanolic extract of Stachys pilifera and its alkaloid and terpenoid fractions on the HT-29 colorectal cell line. Methods: In the present study, HT-29 cells were cultivated and afterwards incubated in the methanolic extract of Stachys pilifera and its fractions at various concentrations for 24 hours. Cell viability was measured by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. The effects of the extract and the tests performed on cell death mechanisms such as fragmentation of DNA and apoptosis were performed by flow cytometry. Cisplatin was used as the positive control. The collected data was analyzed by ANOVA and Tukey test. Results: The results of IC50 of methanolic extract, alkaloid, tropenoid, and cisplatin on HT-29 cells after 24 hours were 612.8, 46.4, 46.8 and 4.06 μg / ml, respectively. The results indicated that the inhibition of cell proliferation was dose-dependent. The methanolic extracts of Stachys and cisplatin resulted in DNA fragmentation. The results of apoptosis test revealed that the highest percentage of apoptosis was observed in cisplatin (30.8%) and methanolic extracts (23.2%) than the control (untreated) group (P <0.05).