چكيده فارسي :
شايع ترين ويروس تاثيرگذار بر كاهو در سراسر مزارع جهان، ويروس موزاييك كاهو (Lettuce mosaic virus; LMV) متعلق به خانواده Potyviridea و جنس Potyvirus است. روش هاي متعددي شامل آزمون هاي سرولوژيكي و مولكولي جهت تشخيص اين ويروس وجود دارند، اما اين روش ها زمان بر بوده و نيازمند ابزارهاي پيچيده اي هستند. هدف از اين پژوهش، كاهش زمان موردنياز جهت تشخيص LMV با استفاده از روش تكثير هم دماي وابسته به حلقه (LAMP) بود. نمونه هاي برگي (38 نمونه) با علايم مشابه به ويروس موزاييك كاهو از سطح استان كردستان جمع آوري و براي آزمون سرولوژيكي (DAS-ELISA) به كارگرفته شدند و در نهايت چهار نمونه مثبت تشخيص داده شد. سپس RNA كل استخراج و واكنش رونويسي معكوس LAMP به صورت يك مرحله اي، تحت شرايط هم دما انجام شد و نتايج به وسيله الكتروفورز بر روي ژل آگارز و رنگ هيدروكسي نفتول بلو (HNB) ارزيابي شد. نتيجه مثبت استفاده از رنگ HNB تغيير رنگ مخلوط واكنش از بنفش به آبي آسماني بود. علاوه بر اين، در اينجا آزمون جديد IC-RT-LAMPجهت تشخيص سريع و آسانLMV (بدون نياز به استخراج RNA) توسعه داده شد و كارآيي آن با آزمون هاي ديگر مقايسه شد. از مزاياي روش RT-LAMP در مقايسه با ساير روش هاي پيشين مي توان به اختصاصيت بالا، حساسيت بالا، سرعت بالا، كارآيي بالا، ايمني، سهولت، عدم نياز به تجهيزات پرهزينه جهت تكثير، عدم نياز به استخراج RNA (در آزمون IC-RT-LAMP)، عدم نياز به كارهاي تشخيصي بعد از تكثير، تشخيص مشاهده اي و كاربردوستي آن اشاره كرد.
چكيده لاتين :
The most common virus affecting lettuce (Lactuca
sativa L.) in the field worldwide is Lettuce mosaic virus
(LMV), belonging to the family Potyviridea, genius
Potyvirus. There are several techniques to detect LMV
including serological and molecular assays, but these
methods take a long time and requiring sophisticated
tools. The aim of this study was to reduce the time
required to detect LMV, using loop-mediated
isothermal amplification (LAMP) technique. Leaf
samples (38 samples) with symptoms similar to LMV
were collected from Kurdestan province and were
subjected to a serological (DAS-ELISA) test and lastly,
four samples were detected as the positive samples.
Then, total RNA was extracted and one-step reverse
transcription (RT)-LAMP was carried out under
isothermal conditions and results were evaluated by
agarose gel electrophoresis and hydroxynaphthol blue
(HNB) dye. A positive result using the HNB dye was a
color change in master-mix from the violet to sky blue.
In addition, a novel immunocapture (IC)-RT-LAMP
assay for rapid and easy detection (without RNA
extraction) of LMV was developed here and its
potential compared with other assays. The advantages
of RT-LAMP method in compare to other methods
include the high specificity, high sensitivity, high
rapidity, high efficiency, safety, fascinatingly, no
requirement of expensive and tools for amplification,
no need to RNA extraction (in IC-RT-LAMP assay), no
post-amplification treatment of the amplicons, visual
detection and user friendly.
