كلون سازي و بيان ژن ميدكاين نوتركيب انساني در اشريشياكولاي سويه‌ي اوريگامي

هدف: هدف اين پژوهش كلون سازي و بيان ژن كد كننده‏ي ميدكاين انساني در اشريشياكولاي بوده كه پس از انجام مراحل لازم در مقياس آزمايشگاهي محقق گرديد. مواد و روش‏ها: روش‌ها شامل كشت سلول، استخراج RNA، ساخت cDNA، تكنيك‌هاي كلون‌سازي، القاي بيان با IPTG (ايزوپروپيل‌تيوگالاكتوزيداز)، ارزيابي بيان به‏وسيله‌ي ژل پلي‌اكريل‌آميد و تاييد توسط وسترن بلات بود. نتايج: ژن ميدكاين در pET21a(+) كلون و سپس به اوريگامي منتقل شد. اين فاكتور رشد در كلوني حاوي pET21a(+) نوتركيب پس از 16 ساعت انكوباسيون در دماي 18 درجه سانتي‏گراد با هم زدن در 250 دور در دقيقه، در سطح سيتوپلاسمي بيان گرديد. بيان پروتئين 13 كيلودالتوني داراي دم هيستيديني از طريق وسترن بلات مورد تاييد قرار گرفت. نتيجه‌گيري: با‌توجه به اينكه سويه اوريگامي در ژن هاي TrxB و gor جهش يافته است، سينوپلاسم محيطي اكسيد كننده مي باشد، به‏همين سبب باعث افزايش تشكيل باندهاي دي سولفيد مي‏شود. بنابراين به‏نظر مي‏رسد كه پس از بيان ميدكاين، باقي مانده‏هاي سيتوزين به‏صورت محلول باقي مي‏مانند. اين شرايط باعث به‏وجود آمدن محيط مناسبي براي فولدينگ صحيح پروتئين و حل شدن آن مي‏شود.