افزايش بقاي سلول‏هاي دوپامين ساز PC12 در برابر سميت 6OHDA با افزايش بيان فاكتور DJ1

هدف: هدف از اين مطالعه بررسي تاثير DJ1 بر افزايش بقاي سلول‏هاي دوپامين ساز در برابر سميت پاركينسوني  مي‏باشد. مواد و روش‏ها:  ابتدا لنتي ويروس‏هاي نوتركيب ناقل توام ژن هاي DJ1 و گزارش‏گر Jred توليد شده و براي آلوده سازي سلول‏ها استفاده شدند. بدين منظور سه پلاسميد لنتي ويروسي به‏نام‏هاي ناقل، بسته بندي و غشا براي ترانسفكشن سلول‏هاي HEK293T به‏عنوان رده سلولي مولد ويروس به‏كار برده شدند. محيط سلول‏هاي ترانسفكت شده 24 و 48 ساعت جمع آوري و تغليظ شد تا ذخيره لنتي ويروسي به‏دست آيد. به‏دنبال ترانسدوكشن سلول‏هاي دوپامين ساز PC12 با اين ذخيره غليظ ويروسي، سلول‏هاي مزبور افزايش بيان DJ1 را آغاز كردند. پس از تيمار اين سلول‏ها با توكسين 6OHDA، ميزان بقاي آن‏ها در مقايسه با شاهد اندازه‏گيري شد. نتايج: مراحل ترانسفكشن سلول‏هاي HEK293T و آلودگي سلول‏هاي PC12 با ذخيره ويروسي به‏طور موفقيت آميز به انجام رسيد، زيرا بيان ژن گزارش‏گر Jred با استفاده از ميكروسكوپ فلورسنس در هر دو مرحله مشاهده شد. سپس افزايش بيان DJ1 با تكنيك RT PCR اثبات شد. آزمايش‏هاي بعدي نشان داد كه افزايش بيان DJ1 باعث افزايش چشم‏گيري در بقاي سلول‏هاي PC12 در برابر سميت ناشي از 6OHDA مي‏شود. درصد بقاي سلول‏هاي PC12 كه افزايش بيان DJ1 داشتند، در حدود 30 درصد بيشتر از درصد بقاي سلول‏هاي كنترل برآورد شد و اين افزايش از نظر آماري معني‏دار بود. نتيجه‏گيري: افزايش بيان ژن DJ1 در سلول‏هاي دوپامين ساز PC12 مقاومت و بقاي اين سلول‏ها را در برابر سميت نوروني 6OHDA به‏طور معني‏دار و چشم‏گيري افزايش مي‏دهد.