همسانه سازي ژن شبه انسولين انساني در ناقل هاي بياني گياهي

گياهان تراريخت، بيورآكتورهاي مناسبي براي توليد پروتئين هاي نوتركيب در سطوح بالا و با كيفيت بهتر مي باشند. همسانه سازي ژن كدكننده پروتئين هدف در ناقل بياني مناسب يكي از مراحل مهم در انتقال و بيان موفق پروتئين در گياه مورد نظر مي باشد. هدف از اين تحقيق، همسانه سازي cDNAي فاكتور رشد شبه انسولين-1 (IGF1) در ناقلهاي بياني مناسب گياهي بود. براي اين منظور، ابتدا با استفاده از يك جفت آغازگر اختصاصي، cDNAي ژن IGF1 تكثير و با استفاده از سايتهاي برشي تعبيه شده در ساختار آغازگر در ناقل پايه pMCS5 وارد گرديد. با توجه به مزاياي غلات بدليل كشت وسيع، بيوماس بالا، قابليت ذخيره دانه و قابليت استفاده خوراكي براي توليد پروتئين هاي دارويي، پس از توالي يابي، cDNA در يك ناقل مناسب براي انتقال و بيان پروتئين در غلات همسانه سازي گرديد. همچنين با توجه به اينكه كلروپلاست هاي تراريخت پتانسيل بيشتري براي توليد پروتئين نوتركيب عملكردي در سطوح بالا دارند، cDNAي توالي يابي شده در دو ناقل اختصاصي براي انتقال و بيان IGF1 در كلروپلاست توتون نيز همسانه سازي گرديد. در يكي از اين ناقلها، ژن گزينشگر بوسيله دو توالي مستقيم LoxP احاطه شده تا امكان حذف ژن انتخابگر از طريق سيستم Cre/Lox پس از گزينش گياهان تراريخت فراهم گردد.