تشخيص مولكولي ژن‌هاي بتالاكتاماز blaTEM، blaCTX و blaSHV در سويه‌هاي باسيلوس سوبتيليس جدا شده از نمونه‌هاي شير خام و پنير: يك مطالعه آزمايشگاهي

Molecular Detection of blaTEM, blaCTX and blaSHV beta-lactamase Genes in Bacillus Subtilis Strains Isolated from Samples of Raw Milk and Cheese: A Laboratory Study

زمينه و هدف: سويه‌هاي مولد بتالاكتاماز وسيع الطيف (Extended spectrum β-lactamase; ESBLs) براي سيستم بهداشتي مشكلات زيادي ايجاد كرده است. علاوه بر اين، اين سويه‌ها باعث افزايش مقاومت به ساير آنتي‌بيوتيك‌ها نيز شده است. لذا اين مطالعه با هدف تعيين تشخيص مولكولي ژن‌هاي بتالاكتاماز blaTEM، blaCTX و blaSHV در سويه‌هاي باسيلوس سوبتيليس جدا شده از نمونه‌هاي شير خام و پنير انجام شد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه آزمايشگاهي، تعداد 100 نمونه شير خام و پنير تهيه و كشت داده شد. كلوني‌هاي مشكوك به باسيلوس سوبتيليس با روش‌هاي بيوشيميايي تعيين هويت شدند. براي سنجش حساسيت آنتي­بيوتيكي از روش ديسك ديفيوژن استفاده شد. هم­چنين حضور ژن‌هاي بتالاكتاماز وسيع الطيف blaTEM، blaCTX و blaSHV در سويه‌هاي ESBLs با استفاده از روش PCR (Polymerase chain reaction) مورد ارزيابي قرار گرفت. داده­ها با استفاده از آزمون مجذور كاي آناليز و به­صورت آمار توصيفي (تعداد و درصد) گزارش شد. يافته‌ها: بالاترين ميزان مقاومت در ايزوله‌هايي كه قادر به توليد آنزيم بتالاكتاماز بودند، مربوط به آنتي‌بيوتيك اريترومايسين (75 درصد) و كمترين مربوط به آنتي‌بيوتيك سفوتاكسيم (44/60 درصد) و سفيكسيم (46/20 درصد) بود. از 50 نمونه شير خام، در 21 نمونه، ژن TEM (Temoneira)، در 16 نمونه، ژن CTX (Cephotaximase) و هم­چنين در 3 نمونه، ژن SHV (Sulfhydryl-variable) شناسايي شد. از 50 نمونه پنير، 17 نمونه (45/94 درصد) حاوي ژن TEM، 13 نمونه (35/13 درصد) ژن CTX و هم­چنين در 2 نمونه (5/40 درصد) ژنSHV شناسايي شد. نتيجه‌گيري: با توجه به نتايج، در كنار استفاده از روش‌هاي فنوتيپي جهت تشخيص آنزيم‌هاي بتالاكتاماز، به كارگيري روش‌هاي مولكولي جهت تشخيص كامل اين نوع مقاومت‌ها امري ضروري به ­نظر مي‌رسد.

Background and Objectives: The presence of ESBLs (Extended spectrum β-lactamase) for the health system has many problems. Moreover, these strains have increased resistance to other antibiotics.The aim of this study was to determine the molecular detection of blaTEM, blaCTX and blaSHV beta-lactamase genes in Bacillus subtilis strains isolated from raw milk and cheese samples. Materials and Methods: In this laboratory study, 100 samples of raw milk and cheese were prepared and cultured. The suspicious colonies of Bacillus subtilis were identified by biochemical methods. Disc diffusion method was used to measure antibiotic susceptibility. Also, the presence of blaTEM, blaCTX and blaSHV betalactamase genes in ESBLs strains was evaluated by PCR (Polymerase reaction chain) method. Data were analyzed using chi-square test and reported in the form of descriptive statistics (number and percentage). Results: The highest resistance in isolates that were able to produce the β-lactamase enzyme was related to erythromycin antibiotics (75%) and the least was related to cefotaxime (44.60%) and cefixime (46.20%) antibiotics. Of the 50 raw milk samples, TEM (Temoneira) gene was identified in 21samples, CTX (Cefotaximase) gene in 16 and SHV (Sulfhydryl-variable) gene in 3 samples. Of the 50 cheese samples, 17 (45.94%) samples contained TEM gene, 13 (35.13%) CTX gene and 2 (5.40%) SHV gene. Conclusion: According to the results, the use of molecular methods along with phenotypic methods seems necessary to fully recognize these types of resistance.