كاربرد ايمنوگلوبولين G خالص شده پروتئين‌هاي پوششي و حركتي ويروس برگ بادبزني مو توسط ستون DEAE سلولزي براي شناسايي ويروس برگ بادبزني مو

Purification of coat protein and movemeont IgG of Grapevine Fanleaf Virus (GFLV) by DEAE cellulose column to detect GFLV

در تحقيق حاضر از جدايه‌هاي بومي ويروس برگ بادبزني مو (Grapevine fan leaf virus (GFLV) براي تهيه آنتي‌بادي نوتركيب استفاده شد، بدين ترتيب ژن‌هاي پروتئين پوششي و حركتي ويروس تكثير و در پلاسميد pET21a همسانه‌سازي و به باكتري (Escherichia coli (BL21) منتقل شدند. پس از بيان ژن‌هاي مذكور پروتئين‌هاي بيان شده تخليص و براي ايمني زايي خرگوش استفاده شدند. پس از ايمني‌زايي توسط پروتيئن-هاي پوششي و حركتي، سرم ايمن شده استخراج گرديد. خالص سازي ايمنوگلوبولين G با استفاده از ستون DEAE سلولزي صورت گرفت. سپس آزمون الايزاي غير مستقيم توسط IgGهاي تخليص شده در رقت‌هاي 1:500، 1:1000 و 1:2000 انجام شد و نتايج نشان داد IgG پروتئين پوششي در رقت 1:500 و 1:1000 و IgG پروتئين حركتي در رقت 1:500 بهترين واكنش را با آنتي‌ژن مربوطه نشان مي‌دهد. آزمون لكه گذاري نقطه‌اي در رقت 1:500 با استفاده از هر دو IgG با غشا نيتروسلولزي قادر به رديابي آنتي‌ژن بود. نتايج نشان داد آنتي بادي‌هاي توليد شده بصورت اختصاصي توانايي رديابي GFLV را داراست.

Among several diseases of gapaevine, fan-leaf disese is the most imprtant viral diseases in the garapevine orchards around the world and Iran. Furthermore, early detection and diagnosis of the disease and screning the infected plant could be useful to disase management. In the recent research, local GFLV isolate was selected to prepare the recombinant antibody to diagnosis the infected samples. In the recent research, after the rabbit immunization by coat protein and movement protain of GFLV that expressed into E.coli, the rabbits were bled and the serum fractions were collected and stored at -20°C until required. After the titration of serum fraction, the immunoglobulin G (IgG) from the antiserum was purified using DEAE cellulose column and the efficiency of purification was estimated by the light absorption at 280 nm (A280) and electrophoresis on 12% gel SDS-PAGE. After the IgG purification, indirect-ELISA was done by different dilution including 1:500, 1:1000 and 1:2000. The result showed, IgG-CP-GFLV revelaed the best absorbance in 1:500 and 1:1000 IgG-cp diluted wherase the IgG-MP-GFLV showed the best reaction in 1:500 IgG-MP dilution. DIBA by purified IgGs showed that the IgGs could be detect the related antigenes in 1:500 dilution fot both. Finally, the result revealed that IgGs purified by DEAE cellulose column could be applied in serological and seromolecular test.