پديد آورندگان :
دقيق كيا، حسين دانشگاه تبريز - گروه علوم دامي , وطن خواه، صديقه دانشگاه تبريز - گروه علوم دامي , ابراهيمي، مرضيه دانشگاه تبريز - گروه علوم دامي , مقدم، غلامعلي دانشگاه تبريز - گروه علوم دامي
كليدواژه :
قوچ , مني منجمد , فراسنجه هاي حركتي , يخ گشايي
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: امروزه عمل تلقيح مصنوعي حايگاه ويژه اي در بهبود راندمان توليد و اصلاح و بهبود پيشرفت ژنتيكي بازي مي كند. به منظور تحقق بخشيدن به بسياري از مزاياي بالقوه تلقيح مصنوعي، ذخيره سازي مني براي بلند مدت يك امر ضروري محسوب مي شود. اين امر توسط فرايند انجماد محقق مي شود. مراحل انجماد از جمله فرايند يخ گشايي منجر به تغييرات مورفولوژيكي، آسيب به عملكردهاي طبيعي اسپرم و در نهايت كاهش باروري مي شود. بنابراين، بهبود روش يخ گشايي مني قوچ با شاخص‌هاي كيفي اسپرم ارتباط داشته و از اهميت قابل‌توجهي برخورداراست. هدف از اين مطالعه مقايسه اثرات دو نرخ يخ گشايي بر پارامترهاي ميكروسكوپي و فعاليت هاي آنزيمي مني قوچ پس از فرايند انجماد - يخ گشايي بود.
مواد و روش ها :در اين مطالعه، نمونه‌هاي مني از پنج رأس قوچ قزل، با استفاده از مهبل مصنوعي، دو بار در هفته جمع آوري شد. براي از بين بردن اثرات فردي دام‌هاي نر، نمونه هاي مني در هر بار اسپرم گيري با هم مخلوط شدندو سپس مورداستفاده قرار گرفت. نمونه ها با رقيق كننده تريس حاوي 5/1% لستين سويا و 7% گليسرول، رقيق شدند. نمونه‌هاي رقيق شده در معرض بخار ازت منجمد گرديده و نهايتا تا زمان ارزيابي در تانك حاوي ازت مايع ذخيره شدند. پايوت هاي حاوي مني با حجم ml 25/0 در حمام آب گرم توسط دو پروتكل (i)ºc 37 بمدت s30 و (ii)ºc 60 بمدت s6 يخ گشايي شدند. بدنبال فرايند انجماد-يخ گشايي، اثرات زمان و دماي يخ‌گشايي بر ويژگي‌هاي جنبايي (CASA)، زنده‌ماني، يكپارچگي غشاء پلاسمايي (HOS test)، ناهنجاري‌هاي مورفولوژيكي، غلظت مالون دي آلدهيد (MDA)، فعاليت‌هاي آنتي اكسيداني (GPx ،SOD) و ظرفيت تام آنتي اكسيدان مني (TAC) ارزيابي شدند.آزمايش به صورت طرح كاملا تصادفي انجام شد و مدل آماري شامل اثر دما و زمان يخ گشايي است. تجزيه و تحليل داده ها داده‌ها به كمك رويه Proc GLM انجام شد و ميانگين‌ها به روش توكي مورد مقايسه قرار گرفتند. اختلاف معني‌داري در سطح پنج درصد(P<0/05) گزارش شد.
يافتهها: نتايج نشان داد كه فراسنجه هاي حركتي اسپرم همچون درصد تحرك پيش‌رونده (PM)، سرعت در مسير مستقيم (VSL)، سرعت در مسير منحني (VCL) در دماي ºc37 بهبود يافت، اما اين افزايش از نظر آماري معنادار نبود. درصد زنده‌ماني و يكپارچگي غشاء پلاسمايي در ºc37 بمدت s30 نسبت ºc60 بمدت s6 بهبود يافت اما اين افزايش نيز غيرمعني‌دار بود. همچنين ميزان اسپرم‌هاي ناهنجار در نرخ يخ گشايي بالا نسبت به نرخ پايين بهبود نيافت. علاوه براين نتايج حاصل از مقايسه پراكسيداسيون ليپيد (MDA)، فعاليت آنزيم گلوتاتيون پراكسيداز GPx))، سوپر اكسيد ديسموتاز (SOD) و ظرفيت آنتي‌اكسيداني كل ((TAC در دو نرخ يخ گشايي معني دار نبود.
نتيجه گيري :با توجه به نتايج بدست آمده از روش‌هاي يخ گشايي، نرخ يخ‌گشايي ºc60 بمدت s6 نمي تواند جايگزين مناسبي براي نرخ يخ گشايي ºc37 بمدت 30 ثانيه باشد.
چكيده لاتين :
Background and objectives: Today, artificial insemination plays an important role in improving production efficiency and improving genetic progress. In order to realize many of the potential benefits of artificial insemination, semen storage for a long-term is considered a necessary step by freezing process. The freezing process, including the freezing process, leads to morphological changes, damage to the natural functions of the sperm and ultimately reduced fertility. Therefore, improving the thawing method of ram semen is related to the sperm quality indicators and is of considerable importance. The purpose of this study was to compare the effects of two thawing rates on microscopic parameters and enzyme activity of ram semen after freeze-thawing process.
Materials and methods: In this study, semen samples were collected from five Ghezel ram using an artificial vagina twice a week. To eliminate the individual effects of animals, semen samples were pooled after each sampling. Then diluted with Tris diluent. The diluted semen samples were frozen in nitrogen vapor and eventually stored in a tank containing liquid nitrogen until evaluation. The straws containing 0.25 ml semen were thawed at water bath temperatures at (i) 37ºC for 30s and (ii) 60ºC for 6 s. Following the freeze-thawing process, the effects of time exposure and thawing temperature on the kinematic features (CASA), viability, plasma membrane integrity (HOS test), morphological abnormalities, malondialdehyde (MDA) concentration, antioxidant activity (GPx, SOD) and total antioxidant capacity (TAC) were evaluated. The experiment was conducted as a completely randomized and the statistical model includes the effect of temperature and thawing time. The data were analyzed by the general linear model (GLM) procedure and statistical differences between the various group means were determined by Tukey's test. Significant differences were reported at the level of (P<0/05).
Results: The results showed that sperm motility parameters such as PM, VSL, VCL were improved at 37°C, but this increase was not statistically significant. The viability and plasma membrane integrity was improved at 37°C for 30 s compared 60°C for 6 s, but it was no significant. Also, total abnormality did not improve at high thawing rates than low rates. In addition, the results of the comparison of lipid peroxidation (MDA), glutathione peroxidase (GPX), superoxide dismutase (SOD) and total antioxidant capacity (TAC) were no significant at two thawing rates.
Conclusion: According to the results obtained from thawing methods, the thawing at 60°C for 6s cannot be a suitable alternative for semen thawing at 37°C for 30 seconds.
