تأثير ميتومايسين C و همكشتي با سلول هاي فيبروبلاست و كومولوس بر بلوغ آزمايشگاهي اووسيت هاي نابالغ موش سوري

Effect of Mitomycin C and Co-culture with Fibroblast and Cumulus Cells on In vitro Maturation of Immature Mouse Oocytes

سابقه و هدف: ميتومايسين C كه به منظور جلوگيري از تكثير سلول‌هاي همكشتي در كشت سلول به كار مي‌رود، ممكن است با تأثير مخرب خود بر اين سلول‌ها نهايتاً اثرات نامطلوبي بر بلوغ اووسيت‌ها بگذارد. اين مطالعه با هدف بررسي تاثير ميتومايسين و همكشتي سلول‌هاي فيبروبلاست و كومولوس بر بلوغ آزمايشگاهي اووسيت‌هاي نابالغ موش انجام گرفت. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، اووسيت‌هاي مرحله وزيكول زايا به دست آمده از موش‌هاي سوري در محيط aMEM تكميل شده با FSH،hCG ، سرم جنيني گاوي، پني‌سيلين و استرپتومايسين در گروه‌هاي ذيل كشت شدند: گروه كنترل و گروه‌هاي آزمايشي 1: همكشتي با سلول‌هاي كومولوسي، 2: همكشتي با فيبروبلاستي جنيني موش، 3- همكشتي با سلول‌هاي كومولوسي تيمار شده با ميتومايسين C، 4- همكشتي با فيبروبلاست جنيني موش تيمار شده با ميتومايسين C. پس از 24 ساعت، تعداد اووسيت‌هاي بالغ نشده، متافاز II، GVBD و دژنره شده با استفاده از ميكروسكوپ معكوس بررسي شد. آناليز واريانس و مقايسه ميانگين ها با استفاده از آزمون Tukey انجام گرفت. يافته‌ها: درصد اووسيت هاي مرحله وزيكول زايا (2/75±24) و متافاز (II(2/28±51 در گروه كنترل با اختلاف معني‌داري به ترتيب بيش‌تر از 2/25±8 و 2/29±10 و 2/28±10 و1/19±11 و كم تر از 2/34±64 و 2/62±63 و 2/86±62 و 2/47±62 همه گروه‌هاي آزمايشي بود. با اين حال، بين گروه‌هاي آزمايشي اختلاف معني‌داري مشاهده نشد. استنتاج: همكشتي با سلول هاي فيبروبلاست و كومولوس باعث بهبود بلوغ آزمايشگاهي اووسيت‌هاي نابالغ گرديد و با توجه به عدم وجود اختلاف معني‌دار بين گروه‌هاي آزمايشي مي‌توان حذف بخش غيرفعال سازي سلول‌هاي مذكور با ميتومايسين را از پروتكل‌هاي رايج پيشنهاد نمود.

Background and purpose: Mitomycin C (MMC) is used as an antiproliferative agent for feeder cells in cell culture. It may induce destructive effects on these cells and eventually on oocytes maturation. This study was conducted to investigate the effect of MMC and co-culturing with fibroblast and cumulus cells on in vitro maturation (IVM) of mouse immature oocytes. Materials and methods: In this experimental study, germinal vesicle oocytes (GV) obtained from NMRI mature female mice were cultured in αMEM supplemented by FSH, hCG, fetal bovine serum (FBS), penicillin and streptomycin, at 37 °C and 5% CO2 in following groups: a control group and four experimental groups; 1– co-cultured with cumulus cells, 2 – co-cultured with mouse embryonic fibroblast (MEF) cells, 3 - co-cultured with cumulus cells treated with MMC, and 4 - co-cultured with MEF treated with MMC. After 24 hours, number of GV, GVBD, MII and degenerated oocytes were determined using invert microscope. Data were analyzed using ANOVA with Tukey test. Results: The percentages of GV (24±2.75) and MII (51±2.28) oocytes in control group were significantly higher (8±2.25, 10±2.29, 10±2.28, 11±1.19) and lower (64±2.34, 63±2.62, 62±2.86, 62±2.47) than those in all experimental groups, respectively. Nevertheless, no significant difference was observed between experimental groups. Conclusion: Co-culturing with fibroblast and cumulus cells promoted in vitro maturation of immature oocytes. There was no significant difference among experimental groups, therefore, removal of monolayer inactivation step by MMC from such protocols can be proposed.