شناسايي مولكولي عوامل مايكوپلاسمايي ‌در موارد مشكوك به پلوروپنوموني واگير بزان

MOLECULAR IDENTIFICATION OF MYCOPLASMA AGENTS IN SUSPECTED CONTAGIOUS CAPRINE PLEUROPNEUMONIA

پلوروپنوموني واگير بزان از مهمترين عفونت‌هاي شايع در منطقه خاورميانه است. تا كنون گزارشي از شناسايي و جدا سازي گونه‌هاي درگير در ايران وجود ندارد. . هدف از اين مطالعه، جداسازي و شناسايي مولكولي عوامل مايكوپلاسمايي موارد مشكوك به اين بيماري در گله‌هاي بز مي باشد. مجموع 100 نمونه ريه از 20 گله مشكوك به پلوروپنوموني، از كشتارگاه‌هايي در نزديكي كرمانشاه، در طول سال 1386-1384 جمع آوري و به آزمايشگاه ميكروبيولوژي منتقل شدند. ضايعات ماكروسكوپي شامل هپاتيزايسيون ريوي با زخم‌هاي خاكستري و سفيد(جامد شدن) و ظاهر منقوط و فيبريني و يا بدون فيبرين بودند. نمونه‌ها در محيط كشت PPLO براث و آگار كشت داده شدند. پس از پاساژهاي متعدد، از 4 گله مشكوك، تك كلوني تخم مرغي شكل مايكوپلاسما جداشد (22/2 درصد.) سپس DNA نمونه‌ها به روش فنل–كلروفورم استخراج شدند و تحت واكنش PCR با استفاده از پرايمر اختصاصي جنس قرار گرفتند. علاوه بر 4 نمونه مثبت قبلي در كشت، نمونه‌هاي 5 گله ديگر آلودگي به جنس مايكوپلاسما رادر واكنش‌ PCR نشان دادند(45 درصد.) ‌بررسي نمونه‌هادر واكنش PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي از نظر كلاستر مايكوييدس، گونه‌هاي كاپري كولوم كاپري پنومونيه و مايكوئيدس مايكوئيدس كلوني بزرگ در كنارگونه آگالاكتيه(به عنوان كنترل منفي) نشان داد كه آلودگي به اين گونه‌ها وجود ندارد. با اين وجود اعلام وضعيت عاري بودن گله‌هاي بز در ايران، ازنظر ابتلا به پلوروپنوموني واگير نيازمند تحقيقات وسيعتر و مطالعه تعداد نمونه‌هاي بيشتر در آينده است.

Contagious Caprine Pleuropneumonia (CCPP) is one of the common infections in the middle east regions. So far, there has not been received any report about isolation and identification of these agents in Iran. The aim of this study is to diagnose and isolate mycoplasma agents in suspected goat flocks. Total of 100 pneumonic lung specimen from 20 CCPP suspected flocks were collected from abbatoirs close to Kermanshah during 1384-1386 and had been sent to Microbiology Lab. Gross lesions showed hepatization with grey and white lesions (consolidation) and motley appearance with or without fibrin. The minced tissue were inoculated to PPLO broth agar. After multiple passages, typical mycoplasma colony was isolated from 4 flocks (22/2%). Mycoplasma DNA was also extracted based on phenol- chloroform method and subjected to generic PCR with specific primers. In addition to the perivious positive samples from tissue culture, 5other flocks also showed contamination with Mycoplasma organisms in PCR tests(45%). Then, the samples were determined for Mycoplasma mycoides cluster infection, M. capricolum capripneumonia and M. mycoides mycoides (L. C), using M. agalactia as negative control, with specific primers in PCR, there has showed no contamination to these strains. However, to declare "free status " from CCPP in goat flocks requires more developed researches and much more samples in further investigation.