تنوع ژنتيكي جايگاه‌هاي TLR4 و IL2 دخيل در سيستم ايمني در چند نژاد مرغ بومي ايران

Genetic Diversity of TLR4 and IL2 Loci Involved In Immune System in Some Iranian Indigenous Chicken Breeds

در اين تحقيق چندشكلي‌هاي­ آللي در ژن­هاي كانديد TLR4 و IL2 دخيل در سيستم ايمني برخي از نژادهاي مرغ­ بومي با استفاده از تكنيك PCR-RFLP بررسي شد. 200 قطعه مرغ شامل نژاد­هاي مرغ بومي عمومي، آذربايجان غربي، مرندي و مازندراني انتخاب شدند. براي شناسايي جهش در ژن­ هاي TLR4 و IL2 به ترتيب از آنزيم هاي Sau96I و HphI استفاده شد. براي جايگاه ژني 257 جفت بازي TLR4، بعد از هضم آنزيمي سه ژنوتيپ CC، CG و GG شناسايي و براي آلل C دو باند 138 و 119 جفت بازي و براي آلل G سه باند 119، 99 و 39 جفت بازي مشاهده شد. در جايگاه ژني 600 جفت بازي IL2، سه ژنوتيپAA ، AB و BB شناسايي و براي آلل A چهار باند 465، 64، 40 و 31 جفت بازي و براي آلل B پنج باند 454، 64، 40، 31 و 11 جفت بازي مشاهده شد. كل جمعيت­ ها از نظر شاخص تعادل براي دو جايگاه ژني مورد مطالعه در تعادل هاردي - واينبرگ قرار داشت. شاخص اطلاعات شانون در جايگاه ­هاي نشانگري TLR4 و IL2 به ترتيب 56/0 و 69/0 و همچنين شاخص تثبيت به ترتيب 05/0- و 10/0- محاسبه شد. بيشترين مقدار شاخص هتروزيگوسيتي مشاهده شده براي جايگاه­ هاي ژني TLR4 و IL2 به ترتيب 55/0 و 40/0 برآورد شد. با توجه به چندشكلي‌هاي موجود در جايگاه ­هاي ژني مطالعه شده و كاهش هتروزيگوسيتي در اين جمعيت­ ها، مي ­توان از بروز تلاقي ­هاي غير تصادفي جلوگيري كرد. اين امر منجر به افزايش هتروزيگوسيتي و در نتيجه مانع از كاهش تنوع ژنتيكي در جمعيت­ ها خواهد شد. همچنين با مطالعه­ ي پاسخ­ هاي ايمني مرتبط با اين دو جايگاه ژني مي ­توان از اين جايگاه به ­عنوان نشانگرهاي مناسب در برنامه­ هاي اصلاح نژاد مرغ­ هاي بومي براي افزايش مقاومت به بيماري­ ها بهره برد.

In this study, allelic polymorphism in candidate genes of TLR4 and IL2 involved in the immune system in four Iranian indigenous chickens were examined using PCR-RFLP technique. A total of 200 birds including common, West Azerbaijan, Marandi, Mazandarani indigenous chicken breeds were selected. For detection of mutation in TLR4 (257 bp) and IL2 (600 bp) genes the PCR products were digested by Sau96I and HphI restriction enzymes, respectively. Two alleles of C (138 and 119 bp) and G (119, 99 and 39 bp) and three genotypes of CC, CG and GG were identified in TLR4 marker site. Following the enzymatic digestion of the IL2 gene, two alleles of A (465, 64, 40 and 31bp) and B (454, 64, 40, 31 and 11 bp) and three genotypes of AA, AB and BB were identified. The whole populations was in Hardy-Weinberg equilibrium for TLR4 and IL2 marker sites. The calculated Shannon information index and fixation index values for TLR4 and IL2 marker sites was estimated to be (0.56 and 0.69) and (-0.05 and -0.10), respectively. The highest observed heterozygosity value for TLR4 and IL2 loci was estimated to be (0.55 and 0.40), respectively. Regarding to the existence of polymorphism in the studied loci and reduction of heterozygosity in these populations, the occurrence of non-random crosses can be prevented. This leads to an increase in heterozygosity and thus prevents the loss of genetic diversity in the populations would be. In the populations also, by studying the immune responses associated with these two loci, these sites can be used as suitable markers in breeding programs for increase of resistance to diseases in indigenous chickens.