ارزيابي ايمونوفنوتايپ و ايمونوتايپ رده‌هاي سلولي ميلومايي KMM1، JJN3، LP1، L363، KMS-12BM و RPMI-8226 جهت تصديق هويت رده‌ها

Immunophenotypic and Immunotypic Evalua-tions of Human Myeloma Cell Lines KMM-1, JJN3, LP1, L363, KMS-12BM and RPMI-8226 for Cell-Line Authentication

زمينه: در بيشتر تحقيقات پره‌كلينيكال كه از رده‌هاي سلولي مربوط به بيماري‌ها استفاده مي‌شود، مي‌بايست ابتدا رده‌ها تصديق و تعيين هويت شوند تا هزينه‌هاي پژوهش صرف سلول نابجا نشده و نتايج حاصل، غيرمرتبط نباشند. در اين تحقيق شش رده سلول ميلوماي انساني (HMCL) به منظور تعيين هويت، از نظر ايمونوفنوتايپ و ايمونوتايپ ارزيابي شدند. مواد و روش‌ها: براي بررسي مورفولوژي از گستره سيتواسپين و رنگ رايت، براي ايمونوفنوتايپ از فلوسايتومتري ماركرهاي CD45، CD2، CD19، CD38 و CD138 و براي بررسي وضعيت ترشحي و ايمونوتايپ، از كاپيلاري الكتروفورز و ايمونوفيكساسيون استفاده گرديد. يافته‌ها: با توجه به مورفولوژي مشخص پلاسماسل، ماهيت همه رده‌هاي سلولي تأييد شد ولي L363 و JJN3 شباهت مورفولوژي بالايي داشتند. در بررسي ايمونوفنوتايپ، گذشته از تأييد ماهيت ميلومايي همه رده‌ها، شباهت كاملي بين دو رده L363 و JJN3 مشاهده گرديد، براي تأييد نهايي، ايمونوتايپ آن‌ها نيز انجام شد كه KMS12BM غيرمترشحه، KMM1 به صورت BJP-λ و مابقي به صورت IgG-λ بودند. نتيجه‌گيري: هويت 4 رده سلولي RPMI-8226، KMS-12BM، KMM1 و LP1 پس از بررسي، تأييد شد ولي هويت دو سلول JJN3 و L363 به دليل شباهت اساسي در مورفولوژي، ايمونوفنوتايپ و ايمونوتايپ مورد ترديد قرار گرفت. در بررسي ما، ايمونوتايپ هر دو IgGλ بودند، اين درحالي است كه طبق اطلاعات حاصل از مقالات و سايت ATCC.org، ماهيت اصلي JJN3 به صورت IgAκ مي‌باشد. لذا اصالت و ماهيت JJN3 مخدوش و در واقع همان رده L363 بوده است. بدين ترتيب رده JJN3 كنار گذاشته شد و نتايج آن برپايه همساني با نتايج L363 تفسير گرديد.

Background: The disease-associated cell lines used in the majority of preclinical trials should be first authenticated and identified to avoid directing research expenditure on wrong cells and obtaining irrelevant results. The present study evaluated the immunophenotypic and immunotypic authenticity of six human myeloma cell lines (HMCLs). Materials and Methods: Cytospin smear and Wright staining were used for invetigating cell morphology, the flowcytometry of the markers CD45, CD2, CD19, CD38 and CD138 for immunophenotypic investigations, capillary electrophoresis for the immunoglobulin secretion potency and immunofixation for the immunotypical investigation of the cells. Results: Given the definite plasma cell morphology, the identity of all the cell lines was confirmed, although a similar morphology was observed in L363 and JJN3. In addition to authenticating the myeloma nature of all the cell lines, immunophenotypic investigations suggested a complete similarity between L363 and JJN3 cell lines. Examining their immunotypes for a final confirmation found KMS12BM to be non-secretor, KMM1 to be BJP-λ and the remaining to be IgG-λ. Conclusion: Despite confirming the identity of four cell lines, i.e. RPMI-8226, KMS-12BM, KMM1 and LP1, that of JJN3 and L363 cells, whose immunotype was determined as IgGλ, was questioned owing to their fundamental morphological, immunophenotypic and immunotypic similarities. On the other hand, a reveiew of literature and ATCC.org suggested that the main nature of JJN3 is IgAκ. The authenticity of the JJN3 cell line was therefore unclear and it was indeed the same as that of L363. The JJN3 cell-line was therefore discarded, and the associated results were interpreted as consistent with the results of L363.