بهينه‌سازي كالوس زايي و بررسي ميزان بيان ژن‌هاي فلاونول سنتاز و چالكون ايزومراز در مسير توليد كوئرستين تحت تأثير اشعۀ UV-B در كشت كالوس خيار تلخ ( .Momordica charantia L )

Optimization callus indication and Study of FLS and CHI gene expression in quercetin biosynthesis pathway in callus culture with UV-B radiation of Momordica charantia

هدف از تحقيق حاضر بهينه‌سازي كالوس زايي و بررسي ميزان بيان ژن‌هاي فلاونول سنتاز و چالكون ايزومراز در مسير توليد كوئرستين تحت تأثير اشعۀ UV-B در كشت كالوس خيار تلخ مي باشد. غلظت‌هاي مختلف تنظيم‌كننده‌هاي رشدBAP و 2-4-D و ريز نمونه جهت توليد كالوس در گياه خيار تلخ در طرح كاملاً تصادفي با سه تكرار ارزيابي شد. تاثير اشعۀ UV-B (پنج گروه (شاهد (نور طبيعي)، 5 دقيقه در معرض اشعه (بررسي بيان ژن در 24 و 48 بعد از اعمال تيمار) و 10 دقيقه در معرض اشعه (بررسي بيان ژن در 24 و 48 بعد از اعمال تيمار)) بر بيان ژن‌هاي مسير بيوسنتزي كوئرستين از جمله فلاونول‌سنتاز و چالكون‌ايزومراز، ميزان فعاليت آنزيم آنتي‌اكسيداني فنيل‌آمونيالياز و فلاونوئيد در بهترين كالوس هاي انتخاب شده بررسي شد. مقايسه ميانگين داده‌ها نشان داد كه بيشترين وزن خشك كالوس در غلظت 5/0 ميلي‌گرم در ليتر 2-4-D و 1 ميلي‌گرم در ليتر BAP براي ريز نمونه ساقه به دست آمد. بيشترين بيان ژن فلاونول سنتاز و چالكون ايزومراز در تيمار اعمال 10 دقيقه اشعۀ UV-B در زمان 24 ساعت بعد از شروع تيماردهي بدست آمده اما اين بيان در 48 ساعت بعد از اعمال تيمار كاهش يافته است. بيشترين بيان فنيل‌آمونيالياز، كوئرستين و فلاونوئيد در زمان 5 دقيقه اعمال تيمار اشعه UV-B در 48 ساعت بعد از اعمال تيمار بدست آمده است. در كل نتايج اين تحقيق نشان داد كه اشعۀ UV-B در سطح كالوس تاثير مثبتي بر بيان ژن‌هاي مسير بيوسنتز فلاونوئيدها داشته است.

The present study aimed to optimize the callus induction and to determine the expression of flavonol synthase and chalcone isomerase genes in the pathway of quercetin production under UV-B rays in bitter cucumber callus cultivation. In this research was used concentration and combine of plant hormone 2, 4-D and BAP and explant to callus induction in Momordica charantia using complete random design with three replication. Genes expression study of Quercetin biosynthesis pathway such as FLS, CHI (were analyzed by 2-∆∆CT) and antioxidant activity assay of phenylalanine ammonia-lyase (Produced by concentration of cinnamic acid) and flavonoid using best callus were selected and affected by UV-B ray (five group(Control(natural light), 5 minute under UV-B ray(studying of gene expression after 24 and 48 hour) and 10 minute under UV-B (studying of gene expression after 24 and 48 hour)). Analysis of variance was shown that kind and concentration of plant hormone was significant on callus induction. Mean square of data was shown that the most callus dry weight was obtained from 0.5 mg/L 2,4-D and 1 mg/L BAP and stem explant. The highest expression of flavonol synthase and chalcone isomerase (chi) was observed in the 10-min UV-B treatment at 24 h after treatment but decreased at 48 hours after treatment. The highest expression of PAL, quercetin and flavonoid were obtained at 5 minutes UV-B treatment at 48 hours after treatment. Overall, the results showed that UV-B radiation at the callus level had a positive effect on the expression of flavonoids biosynthetic pathway genes.