پايش سميت سرب به‌وسيله زيست‌حسگر لوسيفراز رده سلولي Huh7-1x-ARE-luc

Monitoring Lead Toxicity by Huh7-1x-ARE-luc Cell Line Lucifersae Biosensor

اهداف: تجمع راديكال‌هاي آزاد در بدن با ايجاد استرس اكسيداتيو منجر به تخريب پليمرهاي زيستي مي‌شود. به‌دليل ورود فلزات سنگين به محيط‌هاي آبي و خاكي، يافتن روش‌هاي كارآمد براي شناسايي و اندازه‌گيري ميزان فلزات سنگين لازم است. زيست‌حسگرهاي سلولي مي‌توانند در حضور يك محرك از جمله فلزات سنگين، سيگنالي قابل اندازه‌گيري توليد كنند. در اين تحقيق رده سلولي Huh7-1x-ARE-luc تحت كنترل پروموتر حساس به حضور اكسيدان‌ها با هدف پايش سرب استفاده شد و كارآيي آن در سنجش سميت اين مواد به واسطه آرمايش‌هاي لوسيفراز و Real time-PCR بررسي شد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، بعد از ترنسفكشن وكتور نوتركيب سنجش فعاليت ژن لوسيفراز در نمونه‌هاي تيمارشده با سرب انجام شد. تعدادي از كلون‌هاي تاييدشده با فنوتيپ پايدار بعد از پاساژ پنجم براي بررسي بيان ژن لوسيفراز در غلظت‌هاي صفر تا 80ماكرومولار از سرب بررسي شدند. سپس قابليت مهاركنندگي به روش assay MTT و تغييرات بيان ژن‌هاي مسير اكسيداتيو توسط Real time-PCR بررسي شد. تحليل‌هاي آماري با روش ∆Ct و با استفاده از نرم‌افزار graphpad prism 6 انجام شد. يافته‌ها: ميزان بيان ژن گزارشگر همراه با افزايش ماده اكسيداتيو افزايش يافت. كاهش بيان ژن گزارشگر بعد از غلظت 30ماكرومولار سرب قابل مشاهده بود. غلظت 35ماكرومولار سرب، متابوليسم 50% سلول‌ها را مهار كرد. بيان ژن‌هاي مسير آنتي‌اكسيداني در سلول‌هاي تيمارشده با سرب 30ماكرومولار نسبت به ژن كنترل، افزايش معني‌داري داشت. نتيجه گيري: زيست‌حسگر تهيه‌شده از رده سلولي نوتركيب Huh7-1x-ARE-luc حامل ژن گزارشگر مي‌تواند وسيله مناسب و كارآمدي براي سنجش تركيبات اكسيداتيو همچون فلزات سنگيني چون سرب باشد.