بررسي ژن‌هاي خانه‌دار در سويه واكسينال بوردتلا پرتوسيس با تكنيك تايپينگ توالي چندلوكوسي

Analysis of Housekeeping Genes in Bordetella pertussis Vaccine Strains by Multilocus Sequence Typing (MLST

اهداف: بوردتلا پرتوسيس باكتري گرم منفي و هوازي اجباري است كه عامل بيماري سياه سرفه و پاتوژن انحصاري انسان است. سياه سرفه يك عفونت حاد تنفسي است و در نوزادان منجر به مرگ مي شود. هدف اين پژوهش، بررسي ژن هاي خانه دار در سويه واكسينال بوردتلا پرتوسيس با تكنيك تايپينگ توالي چندلوكوسي (mlst) بود.مواد و روش ها: در پژوهش تجربي حاضر، چهار نمونه سويه واكسينال بوردتلا پرتوسيس 134 و 509 و دو نمونه استاندارد tohama i و 18323 جمع آوري شدند. بعد از انجام آزمايش هاي بيوشيميايي، كشت و جداسازي آنها، تخليص dna ژنومي با روش فنل كلروفرم و آناليز توسط روش mlst انجام شد. بعد از تعيين توالي، تجزيه و تحليل توسط نرم افزارهاي استاندارد clustalw 2، mega 5.04 و dnasis max 3 صورت گرفت. شباهت توالي نوكلئوتيدهاي ژن 16s rdna سويه ها به كمك نرم افزار blast با توالي هاي ثبت شده در پايگاه اطلاعاتي ژنومي genbank براي مقايسه و تعيين ميزان تشابه توالي ها انجام شد.يافته ها: با توجه به باندهاي ايجادشده و همچنين ترادف بازي حاصله، ژن هاي خانه دار سويه هاي واكسينال بوردتلا پرتوسيس مورد تاييد قرار گرفت. نتايج واكنش pcr براي ژن هاي pgm، icd، gly a و tyr b نشان داد كه همه نمونه ها داراي ژن هاي خانه دار با وزن ملكولي حدود 500جفت باز بودند.نتيجه گيري: در بررسي ژن هاي خانه دار سويه واكسينال بوردتلا پرتوسيس با تكنيك mlst، سويه هاي واكسن سياه سرفه (موسسه رازي؛ ايران) با سري هاي استاندارد جهاني مطابقت دارد و هيچ گونه تغيير يا انحرافي در ژن هاي مورد مطالعه رخ نداده است.

Aims Bordetella pertussis is a gram negative and obligated aerobic bacterium that causes pertussis disease and it is a specific pathogen in human. Pertussis is an acute respiratory infection and leads to death in infants. The aim of this study was to analyze housekeeping genes in Bordetella pertussis vaccine strains by multilocus sequence typing (MLST). Materials & Methods In the present experimental study, 4 samples of 134 and 509 bacterial strains and 2 standard samples of Tohama I, and 18323 were collected. After biochemical tests, the samples were cultured and separated and the genomic purification of DNA was done by Phenol–chloroform technique and analyzed by MLST. After genome sequencing, the analysis was performed by standard software such as Clustalw 2, MEGA 5.04, and DNASIS Max 3. Sequence similarity of 16S rDNA gene nucleotides was performed, using BLAST software with sequences recorded in the GenBank genome database to compare and determine the sequences similarity. Findings Regarding the created bands and the sequence of the game, the housekeeping genes in Bordetella pertussis vaccine strains were approved. The results of the PCR reaction for Pgm, Icd, Gly A, and Tyr B genes showed that all specimens have homogenous genes with a molecular weight of 500bp. Conclusion Evaluating the housekeeping genes in Bordetella pertussis vaccine strains by MLST vaccine strains (Razi Institute; Iran) correspond with international standard series and no change or deviation has occurred in the studied genes.