غربالگري و جداسازي باكتري هالوفيل مارينوباكتر (جدايه s-14) توليد‌كننده آنزيم خارج‌سلولي ليپاز از چشمه آب شور باداب‌سورت

Screening and Isolation of Extracellular Lipase Producing Halophilic Bacteria Marinobacter sp. S-14 Isolated from Badab-e Surt Hypersaline Spring

اهداف: امروزه توانايي توليد آنزيم هاي هيدرولازي كه در غلظت هاي بالاي نمك فعال هستند، به عنوان رويكرد تازه اي در استفاده از باكتري هاي هالوفيل در بيوتكنولوژي مطرح است. هدف اين پژوهش، غربالگري و جداسازي باكتري هالوفيل مارينوباكتر (جدايه s14) توليد كننده آنزيم خارج سلولي ليپاز از چشمه آب شور باداب سورت بود.مواد و روش ها: در پژوهش تجربي حاضر، 42 كلني خالص باكتري، از نمونه هاي مختلف آب، خاك، رسوب و لجن يكي از چشمه هاي آب شور باداب سورت با تكنيك غربالگري روي محيط كشت اختصاصي باكتري هاي هالوفيل جداسازي شدند. جدايه s14 كه بيشترين فعاليت ليپازي را از خود نشان داد، براي شناسايي توسط روش هاي بيوشيميايي و آناليز ژن 16s rrna انتخاب شد. به منظور بهينه سازي شرايط رشد جدايه با درنظرگرفتن بيشينه زمان رشد باكتري (72 ساعت)، دما، غلظت نمك، ph، ميزان مصرف كربوهيدرات و آسيدامينه بررسي شدند. نتايج حاصل با استفاده از نرم افزار chromas pro 2.1.1 ويرايش و با اطلاعات بانك اطلاعاتي eztaxon مقايسه شد. سويه هايي كه تشابه بيشتري با جدايه منتخب داشتند، مشخص شدند. آناليز توالي 16s rrna توسط نرم افزارهاي bioedit 7.1.9، clustal2x 2.1 و mega 6 انجام و درخت فيلوژني توسط الگوريتم اتصال همسايگي ترسيم شد.يافته ها: جدايه s14 با تشابه بيش از 99% با دو گونه مارينوباكتر فلاويماريس (marinobacter flavimaris) و مارينوباكتر ادهارنس (marinobacter adhaerens) تجانس داشت. جدايه s14 بيشترين ميزان رشد را در غلظت نمك 5%، دماي c˚35 و ميزان اسيديته 7/0 نشان داد.نتيجه گيري: جدايه s14، توليد كننده مناسبي براي آنزيم خارج سلولي ليپاز است و مي تواند از فروكتوز و اسيدآمينه فنيل آلانين به عنوان تنها منبع كربن و انرژي استفاده كند.

Aims Today, the ability to produce hydrolases enzyme that are active in high salt concentrations is considered a new approach to the use of halophilic bacteria in biotechnology. The aim of this study was the screening and isolation of extracellular lipase producing halophilic bacteria Marinobacter sp. S-14 isolated from Badab-e Surt Hypersaline spring. Materials & Methods In this experimental study, 42 pure bacterial colonies were isolated from different samples of water, soil, sediment, and sludge from a hypersaline spring with a screening technique on the specific culture medium of halophilic bacteria. The isolate S-14, which showed the highest lipase activity, was selected for the identification by biochemical methods and 16S rRNA gene analysis. In order to optimize the growth conditions of the isolate, considering the maximum time of bacterial growth (72 hours), temperature, salt concentration, pH, carbohydrate, and amino acid intake were examined. The results were edited by Chromas pro 2.1.1 software, and compared with EzTaxon database. Strains that were more similar to the isolate were identified. Sequence analysis of 16S rRNA were performed by BioEdit 7.1.9, Clustal- 2X 2.1, and MEGA 6, and the phylogenetic tree was drawn by the neighbor joining algorithm. Findings The isolate S-14 had 99% similarity to Marinobacter flavimaris and Marinobacter adhaerens. The isolate had optimum growth in 5% NaCl concentration, 35°C, and 7.0 acidity. Conclusion The isolate S-14 can be an appropriate candidate to produce extracellular lipase enzyme and can utilize Fructose and Phenylalanine as a sole source of carbon and energy.