شناسايي جهش هاي نواحي جهش پذير داغ ژن ERG11 در جدايه هاي مقاوم به فلوكونازول كانديدا آلبيكنس درغرب مازندران

Investigation of mutations in hotspot regions of ERG11 gene in fluconazole-resistant isolates of Candida albicans in the west of Mazandaran

سابقه و هدف: امروزه مصرف گسترده فلوكونازول باعث مقاومت در سويه هاي كانديدا آلبيكنس شده است. تغييرات ساختاري Erg11p در نتيجه جهش در ژن ERG11 يكي از مكانيسم هاي مقاومت آزولي است. اين مطالعه با هدف بررسي جهش هاي ژن ERG11 در جدايه هاي كانديدا آلبيكنس مقاوم به فلوكونازول در غرب استان مازندران انجام شد. مواد و روش ها: در اين مطالعه مقطعي توصيفي، نمونه هاي باليني از مخاط واژينال 120 زن در بيمارستان هاي غرب مازندران به دست آمد. جدايه هاي كانديدا آلبيكنس با استفاده از روش هاي استاندارد مانند لوله زايا و كشت در محيط كروم آگار تعيين هويت شدند. مقاومت و حساسيت جدايه ها نسبت به فلوكونازول به كمك روش هاي كربي بوئر و براث ماكرودايلوشن ارزيابي گرديد. سپس جهش هاي ژن ERG11 در جدايه هاي باليني به روش PCR و توالي يابي در مقايسه با جدايه PTCC 5027 (ATCC10231) تعيين شد. يافته ها: از 45 جدايه كانديدا آلبيكنس،40 جدايه مقاوم و 5 جدايه حساس به فلوكونازول بودند. MIC فلوكونازول µg/ml ≤ 64 تعيين شد. آناليز PCR- توالي يابي آشكار كرد كه 18 جدايه مقاوم به فلوكونازول شش جهش بدمعني (Y257H، E266D، V404I، D421N، V488I و D504V) را در ژن ERG11 داشتند. نتيجه گيري: جهش هاي شناسايي شده در اين مطالعه ممكن است با كاهش تمايل فلوكونازول به ERG11p در ايجاد مقاومت به فلوكونازول در جدايه هاي كانديدا آلبيكنس در غرب استان مازندران نقش داشته باشند.

Background & Objectives: Nowadays, widespread use of fluconazole has resulted in resistance in Candida albicans strains. The conformational changes of Erg11p due to mutations in the ERG11 gene is one of the mechanisms resulting in azole resistance. The aim of our study was to investigate ERG11 gene mutations in fluconazole-resistant isolates of C. albicans in the west of Mazandaran province. Materials & Methods: In this descriptive cross-sectional study, clinical specimens were obtained from vaginal mucosa of 120 women in hospitals of the west of Mazandaran province. C. albicans isolates were identified by standard methods such as germ tubes and CHROMEagar medium culture. The fluconazole resistance and susceptibility of the isolates were evaluated by Kirby Bauer and broth micro-dilution methods. Then, ERG11 gene mutations in resistant isolates were determined by PCR-sequencing method as compared with PTCC5027 (ATCC10231) reference strain. Results: Out of 45 C. albicans isolates, 40 isolates were resistant and 5 isolates were susceptible to luconazole. The MIC o luconazole a etermine a ≥ 6 μg/ml. PCR-sequencing analysis revealed that 18 fluconazole-resistant isolates have six missense mutations (Y257H, E266D, V404I, D421N, V488I, and D504V) in the ERG11 gene. Conclusion: The identified mutations in this study may play role in developing fluconazole resistance in C. albicans isolates in the west of Mazandaran province by decreasing fluconazole affinity to ERG11p.