جدا سازي و شناسايي مولكولي ويبريو هاروي از ماهي باس دريايي آسيايي پرورشي در مزارع استان‌هاي جنوبي كشور ايران

Isolation and molecular identification of Vibrio harveyi from cultured Asian seabass in farms located south provinces of Iran

ويبريو هاروي (.Vibrio harveyi) يكي از عوامل اصلي ايجاد بيماري ويبريوزيس ماهي باس دريايي آسيايي در بسياري از مزارع پرورش ماهيان دريايي در قفس در دنيا محسوب مي­شود. هدف از تحقيق حاضر، جداسازي و شناسايي اين باكتري از ماهي باس دريايي پرورشي در مزارع استان­هاي جنوبي كشور (خوزستان، بوشهر و هرمزگان) بود. درمجموع تعداد 110 قطعه ماهي (80 قطعه ماهي بيمار و تعداد 30 قطعه ماهي به‌ظاهر سالم) در دامنه وزني 700-50 گرم نمونه‌برداري گرديد. جداسازي به روش معمول جداسازي كشت باكتريايي انجام شد و جدايه‌ها ازنظر ويژگي‌هاي بيوشيميايي و ملكولي با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن‌هاي 16S rDNA و vhh به ترتيب اختصاصي جنس و گونه به روش واكنش زنجيره پليمراز دوگانه (Duplex PCR) دوگانه مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج PCR، نشان داد كه از 95 جدايه­ شناسايي‌شده به روش بيوشيميايي، تنها 65 جدايه متعلق به جنس ويبريو بود كه از اين تعداد 46 جدايه (76/70%) به‌عنوان ويبريو هاروي تأييد شد. اين نتايج نشان‌دهنده‌ي ميزان حضور بالاي ويبريو هاروي در ماهي باس دريايي آسيايي پرورشي در مزارع موردبررسي است. همچنين نتايج ويژگي‌هاي بيوشيميايي جدايه‌هاي ويبريو هاروي كه به روش PCR تأييدشده بودند، نشان دادند كه جدايه‌ها نسبت به چندين آزمايش بيوشيميايي واكنش متفاوتي دارند. بنابراين استفاده از روش Duplex PCR كه در اين تحقيق بكار گرفته شد، به‌عنوان يك روش دقيق و سريع در تشخيص ويبريو هاروي معرفي مي‌گردد.

Vibrio harveyi is one of the opportunistic marine environment bacteria that are considered as one of the main causes of Asian seabass vibriosis diseases in many marine cage farms in the world. The aims of this study were isolation and identification of these bacteria in cultured Asian seabass in farms, located southern provinces of IRAN (Khuzestan, Bushehr and Hormozgan). In this study, a total number of 110 Asian seabass (80, with clinical sings of disease and 30, apparently healthy fish) with different body weight ranging 50-700g were sampled. Isolation was done from internal organs (kidney, heart, spleen and liver) in common method of bacterial isolation and isolates subjected to phenotypic and molecular characteristics using duplex PCR amplification of the 16SrDNA & vhh genes respectively genus & species-specific gene. The results of PCR showed that of the 95 phenotypically identified isolates, only 65 isolates belong to the genus vibrio and 46 (70.76%) of them were identified as Vibrio harveyi. These results indicate a high present of Vibrio harveyi in cultured Asian seabass in studied farms. Results of the biochemical characteristics of the isolates confirmed with PCR, showed isolates have different reaction in several biochemical tests. Accordingly, the duplex PCR method presented in this study was introduce as an accurate and rapid method for diagnosis of V. harveyi.