جداسازي و شناسايي مايكوپلاسما بووي‌جنيتاليوم از شير گاو‌هاي مبتلا به ورم پستان باليني با روش-هاي كشت و PCR

Isolation and Identification of Mycoplasma bovigenitalium from bovine milk suffering of clinical mastitis by culture and PCR methods

هدف: مايكوپلاسما بووي­ جنيتاليوم يكي از پاتوژن­هاي ايجاد كننده ورم پستان در گاو­هاي شيرده است. عوارض ناشي از اين بيماري شامل كاهش شير دهي، تغيير كيفيت شير، تورم كارتيه­ ها، ورم مفاصل، عفونت دستگاه تنفسي، عفونت سيستم ادراري، عفونت گوش داخلي و سپتي سمي مي­باشد. هدف از اين مطالعه، جداسازي و شناسايي مايكوپلاسما بووي جنيتاليوم از شير گاو­هاي مبتلا به ورم پستان باليني با روش­هاي كشت و PCR بود. روش كار: در اين مطالعه توصيفي در سال 1395، تعداد 156 نمونه­ ي شير از گاوهاي مشكوك به اورام پستان باليني در گاوداري­هاي صنعتي ايران اخذ گرديد. نمونه­‌ها در محيط PPLO broth و PPLO agar كشت داده شدند. براي استخراج DNA از روش فنل كلروفرم استفاده گرديد. نمونه‌ها از نظرحضور جنس مايكوپلاسما و گونه مايكوپلاسما بووي جنيتاليوم به روش PCR مورد آزمايش قرار گرفتند. به منظور تشخيص اين ميكروارگانيسم به روش مولكولي از پرايمرهاي اختصاصي Mbg F و Mbg R استفاده گرديد. نتايج بدست آمده: در روش كشت از تعداد 156 نمونه، 57 (37%) نمونه كلني‌هاي تخم مرغ نيمرو شده مايكوپلاسما را از خود نشان دادند؛ در حاليكه در آزمون PCR از اين تعداد نمونه، 62 (40%) نمونه از نظر حضور پرايمر جنس مايكوپلاسما مثبت گزارش گرديد و در آزمون PCR اختصاصي گونه نيز، يك نمونه (2%) مثبت مايكوپلاسما بووي جنيتاليوم گزارش شد. نتيجه گيري: نتايج حاصل از اين تحقيق، PCR را به عنوان يك روش سريع، با حساسيت و ويژگي بالا جهت تشخيص مايكوپلاسماها معرفي نمود.

abstract:Background and Objectives: Mycoplasma bovigenitalium is one of the mastitiscausing pathogen in dairy cows. The complications of the disease arereduced feeding, changes in the quality and consistency ofits stiffness, swelling Cartier, arthritis, infection of the mucous membranes of the respiratory tract, urinary tract, ear infections and septicemia. The purpose of this study was to Isolation and Identification of Mycoplasma bovigenitalium from bovine milk suffering of clinical mastitis by culture and PCR methods.Materials and methods:In this descriptive study, 156 samples of milk collected from cows with clinical signs of mastitis in dairies industry. Samples were cultured in PPLO broth and PPLO agar. The bacteria DNAs were extracted by phenol/ chloroform method. The PCR assey applied for detection of M. bovigenitalium by molecular method used MbgF, MbgR specific primers . Results: In the culturing method from 156 samples, 57 (37%) samples were reported to be positive for Mycoplasmaand 5 (3%) were suspected to be positive.In the PCR test from 156 samples, 62 (40%) samples were positive for Mycoplasma. In the specific PCR test, 1 (2%) of these specimens were positive for Mycoplasma bovigenitalium. Conclusion: The use of the molecular method of PCR showed that it is a rapid diagnostic method with high sensitivity and specificity, which is used as a classical method.