جداسازي، تعيين هويت و تعيين مقاومت دارويي مايكوباكتريوم از ماهيان آكواريومي تبريز

Isolation, identification and determination of the drug resistance in Tabriz aquarium fish mycobacteria

مايكوباكتريوز ماهي يك بيماري پيش رونده مزمن است كه توسط گونه هاي مختلف مايكوباكتريوم ها ايجاد مي شود. تشخيص اين بيماري در ماهي هاي زينتي، بطور معمول با استفاده از روش هاي هيستوپاتولوژي، كشت، انجام مي شود. تعيين گونه نيز بر اساس خصوصيات رشد باكتري در دماهاي مختلف، نوع پيگمان، مورفولوژي كلني ها و تست هاي بيوشيميايي مي باشد. اگرچه تشخيص اوليه مايكوباكتريوز ماهي بر پايه علائم باليني خارجي و حضور گرانولوم در بافت هاي احشايي با روش نمونه برداري است، اما برخي موراد، هيچ علائم باليني بوده و يا توده هاي گرانولومي مشاهده نمي شود. با توجه به خصوصيت زئونوتيك بيماري، افزايش اهميت آكواريوم و همچنين افزايش عفونت هاي فرصت طلب بواسطه مايكوباكتريوم هاي غير توبركلوزي در افراد سالمند و بيماران مبتلا به نقص ايمني، درمان بسيار دشوار و دوره هاي درماني طولاني مدت اين عفونت ها، و از طرفي اهميت يافتن آن در ماهي ها كه منجر به تلفات مالي مي شود، موجب شد كه در اين تحقيق به جداسازي و شناسايي گونه هاي مايكوباكتريوم ها در ماهيان آكواريومي طراحي شود. وجود مايكوباكتريوم ها در 53 ماهي كه از آكواريوم فروشي هاي منطقه اي شهر تبريز تهيه شده بودند با روش هاي رنگ آميزي ذيل _ نلسون و كشت روي محيط لوانشتاين_ جانسون مورد تحقيق قراگرفتند. شناسايي گونه هاي مايكوباكتريومي ايزوله شده با ويژگي هاي مورفولوژي و تست هاي بيوشيميايي انجام شد. مقاومت دارويي ايزوله ها نسبت به داروهاي ايزونيازيد، استرپتومايسين، ريفامپين، اتامبوتول، كانامايسين، آميكاسين و سيپروفلوكساسين به روش نسبي در محيط كشت لوانشتاين- جانسون بررسي گرديد. سويه حساس به همه داروها، مايكوباكتريوم توبركلوزيس (H37Rv) جهت كنترل كيفي استفاده شد. در بررسي مستقيم ميكروسكوپي با روش رنگ آميزي ذيل- نلسون، باسيل هاي اسيد فست در هفت نمونه شناسايي گرديد. با استفاده از روش كشت باكتريايي در 3/28% از ماهي ها، گونه هاي مايكوباكتريوم ايزوله گرديد. گونه هاي مختلف مايكوباكتريوم به شرح ذيل شناسايي گرديد: مايكوباكتريوم مارينوم، مايكوباكتريوم فورچئيتوم، مايكوباكتريوم اسمگماتيس، مايكوباكتريوم تره آ، مايكوباكتريوم فلاوسنس و مايكوباكتريوم آزياتيكوم. نتايج حاصل از بررسي نمونه ها نشان داد كه، مايكوباكتريوم فورچئيتوم و مايكوباكتريوم مارينوم بيش از ساير گونه ها ايزوله گرديد. در بررسي حساسيت دارويي ايزوله ها نتايج نشان داد كه بيشترين مقاومت دارويي به استرپتومايسين و كمترين مقاومت به سيپروفلوكساسين مربوط مي شد. در اين تحقيق، مايكوباكتريوم مارينوم، مايكوباكتريوم فورچوئيتوم، مايكوباكتريوم اسمگماتيس و مايكوباكتريوم فلاوسنس كه در ماهي و انسان بعنوان پاتوژن شناخته شده اند از ماهي هاي آكواريومي جدا شدند. سويه هاي ايزوله شده به بيشتر داروهاي مورد استفاده در درمان مقاوم بودند، بنابراين ملاحظات بيشتري در خصوص حضور مايكوباكتريوم ها در ماهيان آكواريومي لازم است تا ميزان انتقال باكتري به انسان كاهش يابد.

Fish mycobacteriosis is a chronic progressive disease that caused by different species of mycobacteria. Diagnosis of the disease in ornamental fish is usually done by bacterial culture and histopathology. Identification is also based on the rate of growth at different temperature, the pigmentation type, the morphology of colony and by biochemical tests. Although the primary diagnosis of fish mycobacteriosis is based on clinical symptoms and the presence of granuloma in visceral tissues by sampling, but in some cases no any clinical symptoms or no granulomas masses are seen. Due to the zoonotic character of the disease, increasing importance of aquariology, and also increasing of opportunistic infections via Non-tuberculous mycobacteria in older persons or immunocompromised patients, also existence of some extremely difficulties to treat like to require the long course of therapy, and on the other hand, the financial losses, so; the present study planned to detection and identification of mycobacterial species in aquarium fish. Existence of Mycobacterial species in 53 fishes were investigated that they were obtained from some local aquarium shops in Tabriz by Ziehl-Neelsen staining and culture on Lowenstein-Jensen (LJ) medium. Identification of isolates was done by morphological characters of mycobacteria on LJ and using of biochemical tests. For drug susceptibility testing, the proportional method on LJ were used for isoniazid, ethambutol, rifampin, streptomycin, kanamycin, ciprofloxacin, and amikacin. The susceptible (H37Rv) standard Mycobacterium tuberculosis strain was used as a control. Acid-fast bacilli were detected on the 7 smears of samples by direct microscopic examination method of Ziehl-Neelsen. In using of the culture method, Mycobacterium spp. were isolated from 28.3% of the fishes. The isolated species were identified as M. marinum, M. fortuitum, M. smegmatis, M. terrea, M. flavescens and M. asiaticum. The study showed that M. fortuitum and M. marinum are more than other species. In the drug susceptibility testing; the streptomycin had the highest resistance (93.33%) and the lowest drug resistance was diagnosed to ciprofloxacin (20%). In the investigation, Mycobacterium marinum, M. fortuitum, M. smegmatis and M. flavescens that are well known as pathogens in fish and humans were isolated, which were resistant to most drugs that are used in the treatment. Therefore, more attention should be paid to the presence of mycobacteria in aquarium fish for reducing the rate of bacterial transmission to human.