بيان نوتركيب انتروتوكسين استافيلوكوكوس اورئوس تيپ B به عنوان كانديداي واكسن

زمينه و هدف: استافيلوكوكوس اورئوس(Staphylococcus aureus)، كوكسي گرم مثبتي است كه مي تواند بيماري هاي مختلفي چون مسموميت هاي غذايي، شوك هاي مخاطره آميز و ... را به وجود آورد. از مهم ترين سموم توليد شده توسط اين باكتري، انتروتوكسين نوع B يكي از معمولترين و مهم ترين توكسين هاي يافت شده و يك سوپر آنتي ژن مي باشد. هدف از انجام اين تحقيق همسان سازي و بيان اين پروتئين به شكل نوتركيب جهت دستيابي به يك ساختار و منبع پايدار براي توليد آن به منظور بررسي هاي آينده به عنوان كانديد واكسن بود. روش بررسي: ژن seb به لحاظ وجود كدون هاي نادر مورد بررسي قرار گرفت و بهينه سازي ژن با استفاده از نرم افزارهاي بيوانفورماتيكي انجام شد. واكنش هضم آنزيمي براي تاييد حضور ژن نوتركيب  seb درون وكتور بياني(+)pET28a انجام شد. پس از تأييد همسان سازي ژن مورد نظر، بيان نوتركيب پروتئين SEB با استفاده از القاءگر مصنوعي IPTG و همچنين تخليص تحت شرايط طبيعي(غيردناتوره) با كمك ستون كروماتوگرافي نيكل(NiNTA) صورت پذيرفت. آناليز وسترن بلات نيز براي تأييد پروتئين SEB انجام شد. يافته ها: شاخص سازگاري كدون(CAI) مربوط به ژن طبيعي 0.68 بود، درحالي كه اين شاخص براي ژن بهينه سازي شده به 0.82رسيد. درصد كدون هاي با شيوع بالا در توالي بهينه شده به 57 درصد افزايش يافت. هضم آنزيمي صحت همسانه سازي ژن seb در وكتور (+)pET28a را تائيد كرد. نتايج نشان داد كه همسانه سازي ژن seb درون وكتور (+)pET28a در يك جايگاه مناسب بين محل هاي مورد انتظار اثر آنزيم هاي برشي انجام شده بود. همچنين ژن seb بعد از القاء با IPTG بيان خوب و قابل توجهي داشت. ميزان پروتئين بيان شده براي هر ليتر از محيط كشت حدود 22 ميلي گرم بود. وسترن بلاتينگ، واكنش پروتئين نوتركيب با آنتي بادي ضد هيستيدين را نشان داد. نتيجه گيري: سازه نوتركيب پايدار محتوي ژن seb توليد گرديد كه بيان نوتركيب قابل توجهي از پروتئين را نشان داد. بنابراين پروتئين SEB را مي توان در مطالعات آينده براي بررسي ميزان ايمن سازي عليه سم SEB مورد بررسي قرار داد.