عنوان مقاله :
تنوع ژنتيكي جدايه هاي لاكتوكوكوس گارويه آ (Lactococcus garvieae) از ماهيان قزل آلاي رنگين كمان (Oncorhynchus mykiss) بيمار در ايران با استفاده از روش RAPD-PCR
عنوان به زبان ديگر :
Genetic Diversity of Lactococcus garvieae Isolated from Diseased Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss) in Iran by RAPD-PCR
پديد آورندگان :
سليقه زاده، رضا دانشگاه شيراز - دانشكده دامپزشكي , اخلاقي، مصطفي دانشگاه شيراز - دانشكده دامپزشكي , شريفي يزدي، حسن دانشگاه شيراز - دانشكده دامپزشكي , سلطانيان، سياوش دانشگاه شيراز - دانشكده دامپزشكي
كليدواژه :
تنوع ژنتيكي , ايران , قزل آلاي رنگين كمان , گارويه آ لاكتوكوكوزيس , لاكتوكوكوس
چكيده فارسي :
لاكتوكوكوس گارويه آ يكي از عوامل اصلي بيماري استرپتوكوكوزيس/لاكتوكوكوزيس در مزارع ماهيان به ويژه ماهي قزل آلاي رنگين كمان مي باشد كه هر ساله خسارات زيادي را موجب مي شود. در اين مطالعه تنوع ژنتيكي 20 جدايه لاكتوكوكوس گارويه آ بدست آمده از تلفات مزارع قزل آلاي رنگين كمان در برخي استان هاي كشور به روش RAPD-PCR مورد مطالعه قرار گرفت. پس از كشت از بافت كليه ماهيان بيمار و جداسازي كوكسي هاي گرم مثبت روي برين هارت آگار (BHI)، در ابتدا با استفاده از روش PCR اختصاصي، تشخيص گونه (با توليد محصول 1100 جفت بازي) جدايه هاي باكتريايي انجام گرفت. سپس ژنوتاپينگ جدايه ها با استفاده از روش RAPD-PCR و دو پرايمر P5 و M13 انجام شد. نتايج حاصل از روش RAPD-PCR نشان داد كه پرايمر P5 در مجموع قادر به توليد حداكثر 3 باند و 4 الگوي باند در ميان جدايهها شد اما پرايمر M13 قادر به توليد حداكثر 7 باند و 5 الگوي باندي شد. همچنين نتايج حاصل از ترسيم درخت فيلوژني بر اساس محصولات RAPD-PCR پرايمر P5 با استفاده از روش UPGMA موجب تفكيك اين جدايه ها در 2 كلاستر اصلي و 4 گروه فرعي ژنتيكي شد، اما با استفاده از پرايمر M13 اين جدايه ها در 2 كلاستر اصلي و 5 گروه فرعي ژنتيكي قرار گرفتند. نتايج اين مطالعه نشان مي دهد كه گرچه مشابهت هاي فنوتيپي بين جدايه هاي لاكتوكوكوس گارويه آ مناطق مختلف ايران وجود دارد ولي اين جدايه ها با همديگر داراي تفاوت هاي ژنتيكي نيز هستند. مطالعات بيشتري در آينده نياز است تا نقش اين تفاوت هاي ژنتيكي كسب شده در اين مطالعه را در ميزان حدت باكتري و ايمني زايي بدنبال واكسناسيون نشان دهد.
چكيده لاتين :
Lactococcus garvieae is one of the main causative agents of streptococcusis/lactococcosis in farmed fish particularly in rainbow trout causing remarkable losses each year. Genotyping of 20 isolates of Lactococcus garvieae strains recovered from the mortality of farmed rainbow trout in different provinces of Iran was performed using RAPD-PCR method. The gram-positive cocci were first obtained from the kidney tissues of diseased trout. The bacterial isolates were grown on brain heart agar (BHI) and were then identified by a specific PCR method. The recovered gram-positive cocci strains were identified as L. garvieae by producing a 1100bp PCR product Then bacterial genotyping were processed with RAPD-PCR using two distinct random primers: P5 and M13. The RAPD-PCR results showed that primer P5 was able to produce maximum of 3 bands and 4 banding patterns, but primer M13 produced maximum of 7 bands and 5 banding patterns. Accordingly, the phylogenetic tree of the RAPD-PCR product using UPMGA software and using the primer P5 included these strains in 2 major clusters and 4 genetic groups, but using the primer M13 included these strains into 2 major clusters and 5 genetic groups. The results of this study indicate that although there are some phenotypic similarities between isolates of L. garvieae in different regions of Iran, these isolates have noticeable genetic differences. Further studies are need to clarify whether such genetic diversity of the isolates are important for bacterial severity and prophylactic vaccination.
