جداسازي مايكوباكتريوم ايويوم زير گونه پاراتوبركولوزيس از نمونه‌هاي مشكوك و تائيد آن به روش Nested-PCR

پاراتوبركلوزيس (بيماري يون) بيماري مزمن گرانولوماتوزي روده باريك توسط مايكوباكتريوم ايويوم تحت گونه پاراتوبركولوزيس (MAP) ايجاد مي‌شود. در كنترل بيماري، مهم‌ترين اقدام تشخيص و جداسازي حيوانات آلوده مي‌باشد لذا هدف اين بررسي جداسازي عامل اين بيماري از دام‌هاي مشكوك و در ادامه تائيد جدايه‌ها با استفاده از تست‌هاي مولكولي بود. براي اين منظور ۱۴۲ نمونه مشكوك ارسالي از استان‌هاي اصفهان، البرز، تهران، خراسان شمالي، خوزستان، زنجان، فارس، قزوين، كرمان و گلستان پس از آلودگي‌زدايي بر روي محيط كشت هرالد اگ حاوي مايكوباكتين و بدون مايكوباكتين كشت داده شدند. پس از استخراج DNA، 16S rRNA PCR و سپس از نمونه‌هاي مثبت Nested-PCR انجام شد. در مجموع از ۱۴۲ نمونه مشكوك ۴۷ جدايه بدست آمد. در گسترش ميكروسكوپي همه جدايه‌هاي مثبت در رنگ‌آميزي زيل نلسون باسيل اسيد فاست مشاهده گرديد و در 83 نمونه از مجموع ۱۴۲ نمونه مورد آزمايش و همچنين از سويه‌هاي مايكوباكتريايي در جواب 16s rRNA PCRباندي در ناحيه bp 543 مشاهده شد كه نشاندهنده حضور مايكوباكتريوم در نمونه‌هاي فوق بود. از تمامي جدايه‌ها و سويه‌هاي كنترل مثبت و منفي Nested-PCR انجام پذيرفت كه در مرحله اول باند bp 398 توسط پرايمرهاي P90 و P91 و در مرحله بعد قطعه‌اي به طول bp 298 توسط پرايمرهاي AV1 و AV2 حاصل گرديد كه نشان‌دهنده وجود مايكوباكتريوم پاراتوبركولوزيس در نمونه‌ها بود. بر اساس اين مطالعه Nested-PCR به عنوان روش مناسب تشخيص سريع قطعي موارد بيماري پيشنهاد مي‌گردد.